平台小知识VOL4：数字PCR

导语

分子诊断的临床应用目前已经进入“精准医疗”时代，越来越多的患者从中获益。随着各肿瘤的液体活检被不同权威临床指南认可，相应的检测技术也越来越多样化，数字PCR的应用在液体活检中有巨大优势，使液体活检的方法获得相对精确的结果。

数字PCR检测技术介绍

数字PCR（Digital PCR-dPCR）技术是一种新的核酸检测和定量方法，又称单分子PCR，它的原理是将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中，在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ，实现“单分子模板PCR扩增”。 扩增结束后，通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。

数字PCR原理图

数字PCR优势

1.  绝对的定量：不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数。
2.  高灵敏度检测：灵敏度高达0.01%，可以检测含量极低的核酸序列（如CTDNA）。
3.  区分浓度差异微小的样品：可以精准测定靶基因相对表达，基因拷贝数变异等。

数字PCR应用举例

EGFR突变的肺癌治疗过程中 的液体活检检测是一个非常具有挑战性的工作 ，但这个基因在亚洲人群的高突变频率使非常多的肺癌患者在接受对应靶向药中受益（约30%）。数字PCR可以以肺癌患者的血浆中游离肿瘤DNA（CTDNA）为样品，检测EGFR敏感性和药物抗性相关的突变。

衡道病理运用数字PCR为精准治疗保驾护航，以数字PCR技术独有的绝对定量和高敏感性， 提供非小细胞肺癌EGFR的相关敏感性和药物抗性相关突变，以数字PCR独有的绝对定量和高敏感性，提供远比其他检测手段的检出率。

 参考文献

1. CSCO 指南：中国原发性肺癌诊疗（2016.v1）
2. Oxnard GR, Paweletz CP, Kuang Y, et al: Noninvasive detection of response and resistance in EGFR-mutant lung cancer using quantitative next- generation genotyping of cell-free plasma DNA. Clin Cancer Res 20:1698-1705, 2014 41