pDＮA 质粒纯化两步法上新-BIA整体柱

BIA 整体柱两步法质粒纯化工艺流程总览

纯化步骤及流程对比步骤三步法两步法þ 步骤少þ 裂解流程更加符合药品的生产标准þ 纯化后的质粒纯度一样þ 减少了分子筛的需求þ 省时、省力、省钱优化的前期处理必须要用中空纤维柱浓缩样品碱裂解法，CaCl2沉淀蛋白质和RNA第一步分子筛：去除RNA，同时将缓冲液置换为疏水柱缓冲液第二步疏水柱：分离开环DNADEAE离子柱：分离去除RNA，杂蛋白，内毒素等第三步离子柱：分离杂蛋白，内毒素等C4柱：分离开环DNA纯化成本对比 （以200mg最小规模为例）所需耗材10L分子筛80ml套装柱þ 总体成本可降低50%þ 规模越大，成本降低越多þ GMP级别的接头，更符合GMP标准þ 轻松放大，避免了装填验证带来的烦恼100ml疏水柱100ml离子柱GMP接头1L以下的层析没有GMP级别的接头，不符合GMP的标准。从8ml开配有GMP级别的接头纯化效果 （相同的纯化体积，相同的洗脱方法，相同上样体积）第一步效果第一步DEAE离子柱纯化的效果，质粒的纯度已经达到90%以上不言而喻疏水柱常规疏水柱回收率和纯度不如BIA的C4整体疏水柱C4整体疏水柱的回收率和纯度要高于常规疏水柱