转座子系统介导的稳转细胞系的构建

构建载有目的基因的重组转座子载体，复苏目标细胞（以下以293T细胞为例）；复苏293T细胞，接种于6孔板中，进行细胞转染；共转染时，重组转座子载体，pSB100，按比例均匀的混合，加入到等体积的转染试剂混合液中，37℃，二氧化碳培养箱培养。

转染48小时后，加入嘌呤霉素的筛选培养基，同时设置未转染的阴性对照，连续筛选培养一周左右，阴性对照组细胞全部凋亡，并转染细胞呈逆抗性生长，抗生素将至一半继续扩增培养。连

续扩增培养，检测目的基因的表达水平（WB检测），传代培养检监测目的基因的表达稳定性。

分离单克隆细胞，接种于96孔板中（每个96孔板按90-100个细胞接种，每孔平均1个细胞），待细胞形成克隆，消化，裂解部分细胞进行基因型鉴定，阳性克隆继续扩大培养，获得单克隆细胞株。