熊果酸和齐墩果酸的分离检测

齐墩果酸 (oleanolic acid ,OA) 和熊果酸 ( 乌索酸 ,ursolic acid ,UA)是两种五环三萜类化合物 ，广泛存在于自然界。据不完全统计，齐墩果酸以游离形式和与糖结合形式广泛存在于约 60 个科 190 种植物；熊果酸以游离形式和与糖结合形式分布于约27 个科 46 个属 62 种植物。

齐墩果酸的消炎、护肝降酶、增强免疫、抑制血小板聚集、降血糖等作用已被人们认识并利用。熊果酸的抗肿瘤、抗肝炎、抗炎抑菌等多方面的临床药理作用也被人们认识，具有广泛的开发前景。而 OA 和 UA 互为同分异构体，性质极为相似，在植物中常常共存，给分离检测带来一定难度。目前，我国分离测定植物中这两种成分多用色谱法。[1]

本方法采用液相色谱法，突破常规二元流动相乙腈/甲醇-水（盐），使用三元流动相乙腈-甲醇-乙酸铵，实现了基线分离。

色谱条件：

试剂：弗顿HPLC乙腈、弗顿HPLC甲醇、弗顿HPLC水、弗顿HPLC乙酸铵

检测器：VWD检测器

色谱柱：Weltech Hisep C18-T（25cm×4.6mm×5µm）

流动相：甲醇-乙腈-10mM乙酸铵溶液=55：27：18（v：v：v）

柱温：25℃

检测波长：205nm

进样量：5µL

样品配制：

空白溶液：流动相甲醇-乙腈-10mM乙酸铵溶液=55：27：18  （v：v：v）

对照品溶液：分别精密称取齐墩果酸、熊果酸对照品适量，加乙腈溶解稀释成100ppm即得。

供试品溶液1：将处理过的样品用乙腈溶解稀释成1000ppm即得。

供试品溶液2：精密称取50mg处理过的样品至50mL容量瓶中，分别加入5ml 100ppm齐墩果酸、熊果酸对照溶液，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

色谱图：

结论：

1.弗顿乙腈-甲醇-乙酸铵组成的空白基线平稳，且无干扰峰，极大提高了分析方法的准确度。

2.采用三元流动相乙腈-甲醇-乙酸铵，使齐墩果酸和熊果酸实现了基线分离。通过对实际样品检测，齐墩果酸和熊果酸相同出峰位置的色谱峰灵敏度较低，无法进行准确判断；采用加标的方式，提高灵敏度，有助于样品中齐墩果酸和熊果酸的判断。

参考文献：

1.Chaoyue Wang 1, Xiang Wang 1, Shanshan Zhao 2, Guanglei Zuo 3, Min Xu 2, Shengqiang Tong 4, Liquid chromatographic and liquid-liquid chromatographic separation of structural isomeric oleanolic acid and ursolic acid using hydroxypropyl-β-cyclodextrin as additive, J Chromatogr A. 2020 Aug 16;1625:461332.