一种大口黑鲈鱼人工催产混合剂及人工繁育方法与流程
本发明涉及水产动物培育与繁育技术领域，具体涉及一种大口黑鲈亲鱼人工催产混合剂及人工繁育方法。
背景技术：
食用鲈鱼有益于补肝肾，益脾胃，化痰止咳，还能有利于伤口愈合，促进儿童大脑发育。近几年，随着消费者对于水产品质量要求的逐步提升，鲈鱼已取代四大家鱼、鲫鱼、黑鱼等，成为大家餐桌上的重要消费品，消费市场不断扩大。由于鲈鱼的亲鱼与苗种供应远远满足不了市场需求，因此鲈鱼的价格始终处于上升趋势，具有极高的市场价值。
鲈鱼的养殖水域十分广泛，其在常见的淡水池塘、淡水工厂、网箱、内陆盐碱水域中都能很好生长，优异的环境适应能力、较强的抗病力以及饲料来源广泛等优点使其成为我国优良的人工淡水养殖品种。目前广东、浙江、江苏等地的淡水养殖鲈鱼产量也比较可观。根据《中国渔业统计年鉴2019》数据显示，2018年广东省鲈鱼淡水养殖产量达到25.84万吨，位居全国首位。在取得这些可喜成果的同时，我们注意到，雌性鲈鱼一般1年性成熟，属于一次怀卵多次排卵的鱼类。一次怀卵量可达4万-12万粒，平均怀卵量为6万粒。每次排卵期可以排出成熟卵子1万-3万粒，每次生殖周期可以排2-3次。亲鱼的怀卵量、排卵量和排卵次数与其营养、外缘环境与管理密切相关。每次亲鱼产卵周期内，可能有30％-50％卵子由于营养供应不足或无法及时排卵，而发生闭锁或卵子过熟，从而引起卵子质量下降，卵子受精卵与孵化率低，苗种成活率差等问题。因此，如何开发一种能够提高大口黑鲈单次排卵量，增加卵子受精率与孵化率，提高苗种成活率的人工繁育方法成为本领域迫切需要解决的一个技术问题。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种人工催产混合剂，可以明显提高大口黑鲈排卵量和卵子质量，避免发生卵子闭锁。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种大口黑鲈鱼人工催产混合剂，包括：绒毛膜促性腺激素1200～2000iu/ml、促黄体素释放激素类似物2号150～220μg/ml和马来酸地欧酮10～25mg/ml。
优选的，所述人工催产混合剂中绒毛膜促性腺激素为1500iu/ml、促黄体素释放激素类似物2号为200μg/ml、马来酸地欧酮为10mg/ml。
本发明的目的还在于提供了上述催产混合剂在大口黑鲈鱼人工繁育中的应用。
本发明的目的又在于提供了一种大口黑鲈鱼人工繁育方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种大口黑鲈鱼人工繁育的方法，包括以下步骤：
(1)人工催产：选取亲鱼，下午15：00～16：00雌鱼注射权利要求1或2所述的催产混合剂；将注射混合剂的雌鱼与未催产的雄鱼放置于同一水域暂养，以网箱隔开；次日早上6：00～7：00为雄鱼注射权利要求1或2所述的催产混合剂；待雄鱼催产3～6h后，将网箱拆除，使雌鱼与雄鱼充分接触；
(2)收集亲鱼的卵子与精子进行人工受精、受精卵孵化、幼体培育；
(3)将排卵后的亲鱼继续培育8～12d，然后按照步骤(1)进行催产，进行第二次排卵受精。
优选的，步骤(1)中的催产混合剂的注射量为：每500g雌鱼注射0.8～1.2ml催产混合剂，雄鱼注射量为当次雌鱼注射量的一半。
优选的，亲鱼繁育前的培育水温为22～24℃，水流速度为10～20l/min。
优选的，亲鱼培育期间每日投喂饲料两次，所述饲料中蛋白水平为44～46％，油脂水平为8～10％。
优选的，每隔2天，将每千克饲料上喷洒60～100mg的维生素e和维生素a的混合液投喂1次。
优选的，上述混合液由维生素e：维生素a按照1:2的重量比组成。
优选的，步骤(2)中的孵化条件包括：受精卵密度为1.5～2.5万粒/升，水流速度为2～4l/min，水温为22～24℃。
优选的，在鲈鱼孵化出膜6～7d后进行幼体培育，步骤(2)中的幼体培育条件为：苗种密度为8000-10000尾/m3，水流速度为5～8l/min，水温为22～24℃，每隔3天向水中添加60～80ml/m3的em菌。
与现有技术相比，本发明的技术方案的有益效果如下：
(1)本发明通过改良亲鱼培育与选择，有效的提高了亲鱼的选育效率，选择的亲鱼成熟度高，雌鱼的怀卵量高，平均怀卵量在8万粒以上；
(2)本发明提供的催产剂以及催产技术可以有效促进雌鱼和雄鱼性腺发育，提高雌鱼的排卵量和排卵效率，使得雌鱼每次排卵量在4-6万粒，在2次排卵时间内，排卵量可达总怀卵量的90％以上，降低了卵子闭锁与过熟现象的发生几率；
(3)本发明提供催产剂以及催产技术可以有效提高卵子质量，卵子受精率高于85％，孵化率高于90％，苗种成活率高于90％。
具体实施方式
本发明提供了一种大口黑鲈鱼人工催产混合剂，包括：绒毛膜促性腺激素1200～2000iu/ml、促黄体素释放激素类似物2号150～220μg/ml、马来酸地欧酮10～25mg/ml。本发明通过对各催产物质的复配，得到催产混合剂，注射于大口黑鲈亲鱼后，可以明显提高大口黑鲈排卵量，避免发生卵子闭锁与过熟现象。所述配比优选为绒毛膜促性腺激素1500iu/ml、促黄体素释放激素类似物2号200μg/ml、马来酸地欧酮10mg/ml。本发明中绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素类似物2号、马来酸地欧酮均可以为市购产品。在本发明具体实施例中，绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素类似物2号、马来酸地欧酮均购买于宁波第二激素厂。
本发明还提供了上述催产混合剂在大口黑鲈鱼人工繁育中的应用。
本发明还提供了一种大口黑鲈鱼人工繁育的方法，包括以下步骤：
(1)人工催产：选取亲鱼，下午15：00～16：00雌鱼注射权利要求1或2所述的催产混合剂；将注射混合剂的雌鱼与未催产的雄鱼放置于同一水域暂养，以网箱隔开；次日早上6：00～7：00为雄鱼注射权利要求1或2所述的催产混合剂；待雄鱼催产3～6h后，将网箱拆除，使雌鱼与雄鱼充分接触；
(2)收集亲鱼的卵子与精子进行人工受精、受精卵孵化、幼体培育；
(3)将排卵后的亲鱼继续培育8～12d，然后按照步骤(1)进行催产，进行第二次排卵受精。
本发明在亲鱼繁育前1个月，选取体形、体色正常，体质健壮，无疾病伤残的雌雄亲鱼进行亲鱼培养。作为一种优选的实施方式，本发明将亲鱼放入水温为22～24℃，水流速度为10～20l/min的流水中培育，通过对水温和水流速度的调节，达到了刺激亲鱼性腺发育的作用，提高了亲鱼的繁殖能力。其中水温更优选为23℃，水流速度更优选为15l/min。本发明对亲鱼培育的其他环境条件如光照、通气等均可采用常规培育方法。
本发明在亲鱼培育期间每天投喂饲料，优选为每天投喂2次。投喂饲料的蛋白水平优选为44～46％，油脂水平优选为8～10％，促进亲鱼的性腺发育水平，提高产卵能力和卵子水平。本发明对饲料中灰分、粗纤维的含量水平没有限定，常规含量即可。本发明饲料进一步优选为蛋白水平为45％，油脂水平为9％。本发明所述饲料可由鱼油：大豆油：椰子油按照50～60％：20～30％：20～30％的比例组成。本发明通过对饲料营养水平的合理配比，为亲鱼提供了足够的营养，并且相对于常规鲈鱼专用饲料而言，具有促进性腺发育，提高卵子质量，促进亲鱼排卵的作用。本发明中鱼油、大豆油、椰子油均采用本领域常规市售产品即可。
本发明在亲鱼投喂饲料期间，每隔2天，将每千克饲料上喷洒60～100mg的维生素e+维生素a混合液投喂亲鱼1次，进一步优选为每千克饲料喷洒80mg的维生素e+维生素a混合液。上述维生素混合液由维生素e：维生素a按照1:2的重量比组成。本发明通过添加特定量配比的维生素混合液，显著提高了卵子质量，进而提高了后期的受精率、孵化率和苗种存活率。本发明中维生素e、维生素a均采用本领域常规市售产品即可。
本发明选取体形粗短，腹部膨大柔软，卵巢轮廓明显，上下腹大小均匀，有弹性，尿殖乳头稍凸，产卵期呈红润状，上有2个孔的预繁雌鱼；选取体形瘦长，尿殖乳头凹陷、红润，只有1个孔，轻压腹部有少量乳白色精液流出并在水中散开的雄鱼进行人工催产。上述亲鱼选取过程按照本领域常规方法选择性腺发育成熟的亲鱼即可。
本发明在人工催产阶段，将上述催产混合剂分别注射于亲鱼体内，注射部位为鱼体腹鳍内侧，斜下针，进针深1～1.2cm，优选为1.1cm；上述催产混合剂的注射量为：每500g雌鱼注射0.8～1.2ml，进一步优选为0.9～1ml，雄鱼的注射量为雌鱼的一半。
本发明于下午15：00～16：00时对雌鱼进行催产混合剂注射。由于鲈鱼通常是在傍晚，光线较弱的时候产卵，上述催产混合剂的单次注射效应时间为24～25h，因此，本发明发现选在下午15：00～16：00时注射，相对于其他时间而言更有利于雌鱼顺利排卵，且可以进一步提高单次排卵量，不会影响卵子质量。本发明中雄鱼注射时间为雌鱼注射后15～17个小时，本发明发现雄鱼的注射时间为次日早上6：00～7：00时，可以保证雄鱼精子与雌鱼卵子同步发育成熟，在人工授精过程中可有效提高受精率。
本发明将注射催产素的雌鱼与未催产的雄鱼放置于同一水域中暂养，以网箱隔开，雌鱼暂养于网箱内。本发明于此处放置网箱可以保证雄鱼与雌鱼生活在同一水体中，既相互接近又互不影响，并且雄鱼会在水体中释放一些性信号，有助于雌鱼性成熟。待雄鱼注射催产素后3～6h，将网箱拆除，使雌鱼与雄鱼充分接触，网箱拆除时间进一步优选为雄鱼注射催产素后4h。本发明发现，网箱的设置相对于单独暂养亲鱼的方法而言，可以显著提高雌鱼单次排卵量。本发明中对网箱材质并无特殊要求，网孔大小只需保证不使亲鱼穿过即可。
本发明在雌鱼注射催产混合剂24～26h后，轻轻挤压雌鱼腹部，收集卵子；在雄鱼注射催产混合剂9～11h后，采用吸取方式，用胶头滴管轻轻包裹性腺组织后，轻轻吸取出精液；每10000粒卵子先加入0.7％生理盐水2-3ml，促进受精孔张开，再加入0.2～0.4ml精液，最后加入3～5ml水激活受精卵，关闭受精孔，搅动20～30s，完成受精过程，获得受精卵。
本发明在受精卵孵化过程中发现，调节受精卵密度为1.5～2.5万粒/升，并控制水流速度为2～4l/min，水温为22～24℃，能够为受精卵提供良好的水体环境，有效提高受精卵的孵化率，保证70～72h后鲈鱼开始孵化出膜。本发明进一步优选为水流速度3l/min，水温为23～24℃。本发明受精卵孵化过程的其他环境条件如光照、通气等均可采用常规培育方法，本发明不做限定。
本发明在鲈鱼孵化出膜6～7d后，将苗种捞出，放入苗种培育池中，苗种密度为8000-10000尾/m3，优选为9000尾/m3，使用丰年虫作为开口饵料；培育期间连续充气，水温控制在22～24℃，水流速度为5～8l/min，每隔3d换水1/3，换水前后温差不超过0.5℃，自然光周期，保证了新鲜的水体环境。本发明对苗种开口饵料、苗种培育池的选择并无特殊要求，也可以采用常规开口饵料、培育桶等替换。
上述苗种培育池中，每隔3天添加60～80ml/m3的em菌，优选为添加70ml/m3的em菌。上述添加量的em菌可以更好的提高水体有益菌组成，促进大口黑鲈肠道发育，进而提高苗种的存活率。
本发明将排卵后的亲鱼按照上述亲鱼培养方法继续培育8～12天，优选为培育10天，然后进行上述催产过程，两次排卵后雌鱼卵巢基本排空，两次排卵量占雌鱼总怀卵量的90％以上，而且卵子成熟度高，受精率与孵化率均显著提升，有效地提高了雌鱼的繁育效率，节约了时间。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明具体实施例中，大口黑鲈亲鱼为“优鲈2号”，购自中国水产科学研究院珠江水产研究所，但并非是对本发明技术方案的限定。
实施例1
一套大口黑鲈亲鱼培育与人工繁育的改良技术，包含以下步骤：
第1步、亲鱼繁育前1个月，选取鱼体体形、体色正常，体质健壮，无疾病伤残的雌雄亲鱼。将选取的亲鱼分别放入水温为24℃，水流速度为15l/min的流水中。培育期间，每天投喂蛋白水平为44％，饲料油脂水平为10％(鱼油：大豆油：椰子油按照60％：20％：20％比例)的饲料2次。每隔2天，将每千克饲料上喷洒100mg的维生素e+维生素a混合液(1：2)投喂亲鱼1次，加速性腺发育与成熟。同时，选取常规培养的大口黑鲈亲鱼作为对照组，投喂浙江欣欣天恩水产饲料有限公司生产的加州鲈专用饲料，粗蛋白含量45％，脂肪10％，粗纤维5％，粗灰分16％。
第2步、选取预繁雌鱼10尾，体形较粗短，腹部膨大柔软，卵巢轮廓明显，上下腹大小均匀，有弹性，尿殖乳头稍凸，产卵期呈红润状，上有2个孔。雌鱼体高：体宽为2：1。雄鱼4尾，体形较瘦长，尿殖乳头凹陷，红润，只有一个孔，轻压腹部有少量乳白色精液流出，并在水中散开。
第3步、实验组采取人工催产方式，分别配制催产药物绒毛膜促性腺激素1500iu/ml+促黄体素释放激素类似物2号200μg/ml+马来酸地欧酮10mg/ml混合剂。每500g雌鱼注射0.8ml上述的催产混合剂。注射时间为下午15：00，注射部位为鱼体腹鳍内侧，斜下针，进针深1cm。雄鱼在次日早上6：00注射上述的催产混合剂，注射方式与雌鱼相同，注射计量减半。对照组采取自然繁育，雌雄比5：2，雌鱼10尾，雄鱼4尾，将雌雄鱼放置于8m3的暂养桶中，在桶底边上放置棕网片。
第4步、将注射催产素的雌鱼与未催产的雄鱼放置于同一圆形暂养桶中，容积为8m3。雌鱼暂养于桶内规格为2m3的网箱中，与雄鱼隔绝开。待雄鱼注射催产素后4h，将网箱拆除，使雌鱼与雄鱼充分接触，促进排卵。
第5步、雌鱼在注射24h后，雄鱼在9h后，达到效应时间。此时可以明显观察到，雄鱼围绕在雌鱼身边，不断用嘴接触雌鱼的腹部与生殖孔，同时，尾部也不断拍打雌鱼，这是雄鱼期望与雌鱼配对的繁育信号。轻轻挤压雌鱼腹部，用不锈钢盆收集卵子；雄鱼采用吸取方式，用胶头滴管轻轻包裹中性腺组织后，轻轻吸取出精液。每10000粒卵子需加入0.2ml精液，并加入5ml水激活，搅动30s，完成受精过程。将受精卵用黄泥浆脱粘后，放置于孵化桶中，每个孵化桶放置20万粒卵，水流速度为3l/min，水温为23℃。对照组受精卵采用常规的棕网片流水孵化，孵化7天后收集鱼苗，统计数量。
第6步、将排卵后的雌鱼按照第1步操作继续培育10天，然后进行上述催产过程。对照组也继续培育10天后，再进行培育繁育。
表1实验组与对照组亲鱼体重
由表1可见，经过亲鱼培育后，实验组10尾雌鱼的平均体重为846.33g，4尾雄鱼的平均体重为682.48g，对照组10尾雌鱼的平均体重为841.29g，4尾雄鱼的平均体重为713.52g，表明实验组与对照组雌鱼和雄鱼在体重上无显著差异(p>0.05)。
表2实验组与对照组雌鱼产卵量、受精率与孵化率比较
第一次排卵期，实验组10尾雌鱼中，有9尾顺利催产，分别统计了9尾雌鱼的第一次和第二次排卵量、受精率和孵化率。对照组中，10尾雌鱼陆续在3天内产卵。由表2可见，实验组两次产卵量、受精率与孵化率均高于对照组。
实施例2
一套大口黑鲈亲鱼培育与人工繁育的改良技术，包含以下步骤：
第1步、亲鱼繁育前1个月，选取鱼体体形、体色正常，体质健壮，无疾病伤残的雌雄亲鱼。将选取的亲鱼分别放入水温为22℃，水流速度为10l/min的流水中。培育期间，每天投喂蛋白水平为45％，饲料油脂水平为9％(鱼油：大豆油：椰子油按照50％：20％：30％比例)的饲料2次。每隔2天，将每千克饲料上喷洒100mg的维生素e+维生素a混合液(1：2)投喂亲鱼1次，加速性腺发育与成熟。同时，选取常规培养的大口黑鲈亲鱼作为对照组。同时，选取常规培养的大口黑鲈亲鱼作为对照组，投喂浙江欣欣天恩水产饲料有限公司生产的加州鲈专用饲料，粗蛋白含量45％，脂肪10％，粗纤维5％，粗灰分16％。
第2步、选取预繁雌鱼8尾，体形较粗短，腹部膨大柔软，卵巢轮廓明显，上下腹大小均匀，有弹性，尿殖乳头稍凸，产卵期呈红润状，上有2个孔，雌鱼体高：体宽为(3：1)为宜。雄鱼4尾，体形较瘦长，尿殖乳头凹陷，红润，只有一个孔，轻压腹部有少量乳白色精液流出，并在水中散开。
第3步、分别配制催产药物绒毛膜促性腺激素1500iu/ml+促黄体素释放激素类似物2号200μg/ml+马来酸地欧酮10mg/ml混合剂。每500g雌鱼注射0.8ml上述的催产混合剂。注射时间为下午16：00，注射部位为鱼体腹鳍内侧，斜下针，进针深1.1cm。雄鱼在次日早上7：00注射上述的催产混合剂，注射方式与雌鱼相同，注射计量减半。对照组雌鱼8尾与雄鱼4尾自然繁育。
第4步、将注射催产素的雌鱼与未催产的雄鱼放置于同一圆形暂养桶中，容积为4m3。雌鱼暂养于桶内规格在1m3的网箱中，与雄鱼隔绝开。待雄鱼注射催产素后4h，将网箱拆除，使雌鱼与雄鱼充分接触，促进排卵。对照组雌鱼与雄鱼放置于4m3的养殖桶中培育，在桶底边上放上棕网片。
第5步、雌鱼在注射26h后，雄鱼在11h后，达到效应时间。此时可以明显观察到，雄鱼围绕在雌鱼身边，不断用嘴接触雌鱼的腹部与生殖孔，同时，尾部也不断拍打雌鱼，这是雄鱼期望与雌鱼配对的繁育信号。轻轻挤压雌鱼腹部，用不锈钢盆收集卵子；雄鱼采用吸取方式，用胶头滴管轻轻包裹中性腺组织后，轻轻吸取出精液。每10000粒卵子需加入0.2ml精液，并加入5ml水激活，搅动30秒左右，完成受精过程。将受精卵用黄泥浆脱粘后，放置于孵化桶中，每个孵化桶放置20万粒卵，水流速度为3升/分钟，水温为24℃。对照组受精卵采用常规的棕网片流水孵化，孵化7天后收集鱼苗，统计数量。
第6步、孵化72h后鲈鱼开始鱼苗开始出膜，7天后处于平游状态，收集鱼苗。
表3实验组与对照组亲鱼体重
由表3可见，经过亲鱼培育后，实验组8尾雌鱼的平均体重为756.33g，4尾雄鱼的平均体重为693.26g，对照组8尾雌鱼的平均体重为765.23g，4尾雄鱼的平均体重为685.18g，表明实验组与对照组雌鱼和雄鱼在体重上无显著差异(p>0.05)。
表4实验组与对照组雌鱼两次排卵总量与卵子质量比较
由表4可见，实验组每条雌鱼的两次排卵量为8.7～11.3万粒，对照组中每条雌鱼的两次排卵量为5.3～7.2万粒，表明实验组每条雌鱼两次产卵总量显著高于对照组。同时，实验组卵子中卵母细胞闭锁率为9.6～13.8％，对照组中卵母细胞闭锁率为15.3～19.2％，显著高于实验组。实验组中两次受精率、两次孵化率分别为86.3～92.5％、93.4～94.8％，对照组中两次受精率、两次孵化率分别为67.2～72.8％、74.1～75.5％，均显著低于实验组。
表5实验组与对照组总出苗量与苗种成活率
由表5可见，按照改良技术繁育的苗种出苗量可达160万，远高于对照组中的76万，苗种成活率可达90.3～91.2％，显著高于对照组的82.5～84.5％。表明该改良方法极大地提高了大口黑鲈的亲鱼利用与繁苗效率，促进了大口黑鲈高质量苗种供应，加速了产业化发展。
实施例3
为探究本发明中利用催产药物复配得到的催产混合剂的功效，进行了如下单因素实验：
按本发明实施例1实验组中的亲鱼培育方式进行亲鱼培育、选取，选择相同规格、相同培育时间的雌鱼32尾、雄鱼16尾，随机分为四组，分别为实验组1、实验组2、实验组3和对照组，每组8尾雌鱼、4尾雄鱼，对实验组1-3进行人工催产：实验组1选择催产药物为绒毛膜促性腺激素1500iu/ml+促黄体素释放激素类似物2号200μg/ml+马来酸地欧酮10mg/ml混合剂；实验组2选择的催产药物为绒毛膜促性腺激素1500iu/ml；实验组3选择的催产药物为促黄体素释放激素类似物2号200μg/ml。上述催产药物或催产混合剂的注射方式均为：每500g雌鱼注射0.8ml上述的催产混合剂，注射时间为下午16：00，注射部位为鱼体腹鳍内侧，斜下针，进针深1.1cm。将注射混合剂的雌鱼与未催产的雄鱼放置于同一水域暂养，以网箱隔开；雄鱼在次日早上7：00注射上述的催产混合剂，注射方式与雌鱼相同，注射计量减半。3组实验仅在于注射的催产药物不同，其他养殖条件均相同。对照组中亲鱼不进行催产药物或催产混合剂的注射，但保持与实验组同样的养殖方式。各实验组雌鱼体重无显著差异(详见表6)。
表6实验组与对照组亲鱼体重
分别统计四组雌鱼的第一次排卵量和第二次排卵量(详见表7)，可知：实验组1的第一次排卵量可达3.8～4.2万粒，第二次排卵量可达4.2～4.8万粒，实验组1中单次排卵量和两次排卵总量均显著高于其他实验组和对照组。
表7实验组和对照组的两次排卵量
实施例4
为探究本发明中亲鱼培育期间所述饲料对大口黑鲈排卵时间和卵母细胞发育的影响，进行了如下单因素实验：
选择相同规格、发育相似的雌鱼32尾、雄鱼16尾，随机分为四组，分别为实验组1、实验组2、实验组3和实验组4，每组8尾雌鱼、4尾雄鱼，在亲鱼培育期间分别选择不同的饲料喂养：实验组1每天投喂蛋白水平为45％，饲料油脂水平为9％(鱼油：大豆油：椰子油按照50％：20％：30％比例)的饲料2次，每隔2天，将每千克饲料上喷洒80mg的维生素e+维生素a混合液(1：2)投喂亲鱼1次；实验组2中饲料与实验组1相同，喂养次数也为每天投喂2次，但每隔2天，将每千克饲料上喷洒80mg的维生素e投喂亲鱼1次；实验组3每天投喂浙江欣欣天恩水产饲料有限公司生产的加州鲈专用饲料(粗蛋白含量45％，脂肪10％，粗纤维5％，粗灰分16％)2次；实验组4中饲料与实验组3相同，投喂次数也为每天2次，但每隔2天，将每千克饲料上喷洒80mg的维生素e+维生素a混合液(1：2)投喂亲鱼1次。实验组1～4仅在亲鱼培育期间投喂的饲料不同，其余养殖条件均相同，且后期人工催产等方式均相同，为实施例1中实验组的人工繁育方式。对四组实验中的大口黑鲈排卵时间与卵母细胞发育状况进行统计分析(见表8)，可知：实验组1中大口黑鲈首次排卵时间为24～28天，短于实验组2～3，实验组1中两次排卵间隔时间为6～8天，显著短于实验组2～4，且实验组1中卵母细胞闭锁率仅为9.3～15.3％，低于实验组2～4。即实验组1中饲料配方与饲料添加剂组合使用后，可以显著促进大口黑鲈提前排卵，缩短两次排卵间隔周期，并且可以显著降低卵母细胞闭锁率。
表8不同饲料添加组对大口黑鲈排卵时间与卵母细胞发育的影响
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。