植物锌指核酸酶（ZFNs）基因编辑技术原理

锌指核酸酶包含由锌指蛋白组成的DNA结合域和由具限制性内切酶活性的FokI组成的DNA切割域两部分（图1）。DNA结合域通常是由3 - 4个具有Cys2His2基序的锌指蛋白组成，每个锌指蛋白可通过它的α螺旋特异性地识别三联体碱基。DNA切割域的FokI一般需要以二聚体的形式以非特异性地方式切割DNA，会造成DNA双链断裂（图1）。断裂后的DNA通过非同源末端连接和同源重组修复两种方式进行修复，从而产生核苷酸的插入、缺失、替换或点突变等编辑形式。相对于非同源末端连接，由于修复模板的使用，同源重组修复可实现更精确、更可控的修复。

图 1. 锌指核酸酶（Miller et al., 2007）。

实验流程：

参考文献：

• Miller J. C.; et al. (2007) An improved zinc-finger nuclease architecture for highly specific genome editing. Nature Biotechnology, 25(7):778-785.