铜绿假单胞菌基因组编辑技术原理

基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的铜绿假单胞菌基因组编辑服务。成熟的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）编辑体系，助您成功实现基因敲除、基因插入和点突变。

基于Red同源重组法的铜绿假单胞菌基因组改造

铜绿假单胞菌基因敲除的传统方法是利用自身的Red系统对外源进入的DNA进行同源重组，从而实现目标基因的等位替换。通过设计靶基因的同源融合片段，将其克隆至自杀载体中，自杀载体通过接合输入到靶细菌。通过抗生素筛选细菌基因组靶位点整合有自杀载体的插入突变株。在第二轮反向选择压力下，只有铜绿假单胞菌基因组发生第二次同源重组并丢失自杀质粒才可以存活。

基于CRISPR/Cas9平台的铜绿假单胞菌基因组改造

CRISPR/Cas9系统是细菌和古细菌特有的一种天然防御系统,用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。

研究内容

• 铜绿假单胞菌基因敲除（Pseudomonas aeruginosa gene knockout）

• 铜绿假单胞菌基因敲入（Pseudomonas aeruginosa gene knockin）

• 铜绿假单胞菌基因点突变（Pseudomonas aeruginosa gene point mutation）

• 下游应用

• 抗生素及重要工业用酶

• 发现新的基因功能

• 优化代谢通路，提升代谢产物产量，实现工业化生产

• 参考文献：

• Selle K, Barrangou R. Harnessing CRISPR–Cas systems for bacterial genome editing[J]. Trends in microbiology, 2015, 23(4): 225-232.

• Zerbini, F., Zanella, I., Fraccascia, D., König, E., Irene, C., & Frattini, L. F., et al. (2017). Large scale validation of an efficient CRISPR/Cas-based multi gene editing protocol in Escherichia coli. Microbial Cell Factories, 16(1), 68.