【求助】用茎环引物逆转录miRNA，茎环引物的浓度是多少？

如题，我用自己设计的引物做茎环PCR检测某个miRNA，现在做逆转录这一步了，我用的是ＴＡＫＡＲＡ的逆转录试剂盒做的，反应条件如下：
①5×PrimeScript Buffer 2.0μl
②PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5μl
③RT Primer Mixture 0.5μl
④Random 6 mers 0.5μl
Total RNA 500ng
⑤Rnase Free dH2O up to 10μl
※混匀后放入 PCR 仪进行反转录，反应条件：37°C 15min，85°C 5s。
问题1：其中试剂盒中的的③是oligodT primer Mixture（50μM） ，现在我用茎环结构的RT Primer引物,那么我的引物浓度也是跟oligodT primer Mixture一样是50μM吗？
问题2：内参U6和目的基因的RT primer是加在同一个PCR管一起逆转录吗？如果是一起，是分别加0.25μl吗？

你这是一个逆转的步骤
首先问题1，你用茎环结构的RT Primer引物代替剂盒中的的③oligodT primer Mixture（50μM），所用浓度一样。
问题2的答案，不在同一管，你每一个目的基因有独特的逆转录引物，要各自分管；U6又是单独一管，并且用随机引物（U6没有特异的逆转录引物），浓度依照protocol。

最后啰嗦一句，首先你要确认这个TAKARA试剂盒能否做microRNA的逆转。如果能，人家提供的oligodT primer是一种简便的操作方法，根本无需你自己设计茎环引物，因为每个microRNA基因需要独特设计的茎环引物，而oligodT primer则对所有microRNA基因都有效。因此，当我们做许多microRNA逆转时，都用oligodT primer。