4-羟乙基哌嗪乙磺酸的使用与制备方法

Hepes是一种非离子俩性缓冲液，其主要成分是羟乙基哌嗪乙硫磺酸。其在PH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。Hepes的应用十分广泛，而作为生物缓冲剂时可用于细胞培养基中作为缓冲试剂，在蛋白质研究中作为缓冲液和洗脱液，也可用于DNA/RNA提取试剂盒以及PCR诊断试剂盒中。

Hepes作为缓冲剂时有着非常好的一点就是可以在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值，在这种培养条件下，细胞培养器需要封闭完善，避免培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。而Hepes缓冲剂在使用时也有着俩种方法。具体如下：

1、Hepes可根据所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L.

2、亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L（100 x）HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶（2ml/瓶）,需要在4℃或-20℃保存.

在日常生化实验中，特别是细胞培养过程中，通常是少不了Hepes缓冲剂的。而Hepes缓冲剂使用方法已经了解了，后面我们就一起来了解一下Hepes的制备方法。

Hepes的制备方法：直接使用1,2-二氯乙烷作为溶剂，在装有机械搅拌、温度计的100mL的三口瓶中加入羟乙基哌嗪（5.00g,0.02mol)，碳酸钾K2CO3（6.00g，0.04mol），50mL1,2-二氯乙烷，油浴加热90℃（1,2-二氯乙烷沸点85℃），搅拌反应20h。停反应，过滤，用200mL乙酸乙酯（EA）洗涤滤出的盐。滤液旋干，得2.6gHEPES固体。

综上所述，Hepes缓冲剂的应用十分广泛，并且使用方法与制备方法也并不复杂。这便导致在市场上有着许多Hepes的商家，而目前国内真正的生产厂家其实也就那么几家。