JEV：蛋白质组学分析揭示香烟烟雾诱导细胞外囊泡的促凝血特性 / 开普饭

烟草消费是几种慢性疾病的重要危险因素，包括肺癌、慢性阻塞性肺病（COPD）和心血管疾病。已有研究表明香烟烟雾提取物（cigarette smokeextract, CSE）在体外通过不同细胞类型引起细胞外囊泡（EV）的释放增加。此外，吸烟者体内循环EVs的浓度增加。这些EVs是分泌的膜囊泡，其源自质膜（微泡）或多泡内体（外泌体）。两种类型的EVs都携带多种多样的脂质、核酸和蛋白质，并且参与体内平衡和病理学中的多种功能。

由暴露于烟雾的单核细胞和巨噬细胞释放的EVs的功能已有研究。这些EVs促进炎症、蛋白质水解和凝固。然而，EVs功能可以根据EVs类型、分泌细胞及其生理状态而不同。尽管气道上皮是吸入的香烟烟雾的第一线接触，但是由烟雾暴露的气道上皮细胞释放的EVs的功能研究很少。以前的研究已经显示气道上皮细胞在对照条件下和暴露于CSE时分泌表达四跨膜蛋白CD63、CD81和CD9的小EV（尺寸众数为110 nm）。该研究旨在预测这些EVs的功能。为此，研究人员使用超滤和尺寸排阻色谱（SEC）的组合从未暴露或CSE暴露的气道上皮细胞的条件培养基中分离EVs。然后用串联质量标签（TMT）标记分离的EVs并使用纳米级液相色谱与串联质谱（纳米LC-MS/MS）偶联进行定量蛋白质组学分析，假设EVs功能可以基于其蛋白质组学含量预测。

气道上皮细胞在基础条件下和暴露于香烟烟雾提取物（CSE）时分泌细胞外囊泡（EVs）。深入了解这些EVs的组成将有助于揭示它们在体内平衡和吸烟引起的病理学中的功能。该研究描绘了基础条件下和CSE诱导的气道上皮EVs的蛋白质组学组成。将BEAS-2B细胞未暴露或暴露于1％ CSE中24小时，然后使用超滤和尺寸排阻色谱法进行EVs分离。用串联质量标签标记分离的EVs，并使用纳米LC-MS/MS测定其蛋白质组学组成。组织因子（TF）活性通过因子Xa生成测定，通过凝血酶原酶测定的磷脂酰丝氨酸（PS）含量和使用校准的自动血栓图（CAT）检测凝血酶生成。Nano-LC-MS/MS鉴定出585种EVs相关蛋白具有高可信度。其中，根据适度的t检验，在CSE-EV中差异表达201，然后在FDR阈值设置为0.1的情况下进行错误发现率（FDR）调整。功能富集分析显示，CSE-EV（包括TF）中24种途径止血蛋白显著上调。通过基于珠子的流式细胞术证实CSE-EV上TF表达增加，并且与TF活性增加有关。与对照-EVs相比，CSE-EV在正常人血浆中引起更快和更多的凝血酶产生。总之，蛋白质组学分析使我们能够预测体外证实的CSE-EV的促凝血特性。香烟烟雾诱发的EVs可能导致吸烟者观察到的心血管和呼吸风险增加。

在EVs上确认促凝血因子TF和磷脂酰丝氨酸（PS）的存在

JEV：蛋白质组学分析揭示香烟烟雾诱导细胞外囊泡的促凝血特性

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