色谱法的10种较好的生物缓冲液

色谱法是一种实验室技术，通常用于分离和纯化蛋白质。在此过程中，系统的分离能力直接与pH变化有关。例如，流动相（溶剂）的pH值接近pKa，则pH值的微小变化会严重影响保留率，并因此导致分离。由于可电离化合物的保留对流动相pH尤其敏感，因此应在系统中添加缓冲液以控制该变量。

回顾色谱中相关的文献，列出用于此技术的常见的生物缓冲液。尽管人们 普遍认为Tris和MES通常是比较好的选择，但其他缓冲液也已用于阳离子交换色谱，阴离子交换色谱，高效液相色谱（HPLC）和其他类似技术中。

1）BIS-TRIS缓冲区

pH范围： 5.8 - 7.2
pKa（25℃）： 6.46
分子量： 209.2克/摩尔

用作：阴离子交换色谱法中的缓冲液

问题：色谱系统中的某些成分可能与此缓冲液竞争金属结合

2）BES缓冲区

pH范围：  6.4 - 7.8
pKa（25℃）： 7.09
分子量：213.2克/摩尔

用作：阳离子交换层析中的结合缓冲液和洗脱液/凝胶过滤层析中的缓冲液

3）Bicine缓冲液

pH范围：  7.6-9.0
pKa（25°C）： 8.26
分子量：163.2 g / mol

用作：流动相缓冲液和阳离子交换色谱中的洗脱液

4）CAPS缓冲区

pH范围：  9.7 - 11.1
pKa（25℃）： 10.40
分子量：221.32克/摩尔

用作：阳离子交换色谱中的结合缓冲液和洗脱液

5）HEPES缓冲区

pH范围：  6.8 - 8.2
pKa（25℃）： 7.48
分子量：238.3克/摩尔

用途：在阳离子交换色谱中用作结合缓冲液和洗脱液；在两步反向透析方法中进行体外释放测试（未发现缓冲液对HPLC有干扰）

6）MES缓冲

pH范围：  5.5 - 6.7
pKa（25℃）： 6.10
分子量：195.2克/摩尔

用作：

毛细管电色谱中的缓冲液

凝胶过滤色谱中的缓冲液

磷酸纤维素柱色谱中的缓冲液

疏水相互作用色谱中的缓冲液

阳离子交换色谱中的缓冲液

7）MOPS缓冲区

pH范围：  6.5 - 7.9
pKa（25℃）： 7.14
分子量：209.3克/摩尔

用作：色谱中蛋白质纯化的运行缓冲液

8）PIPES缓冲区

pH范围：  6.1 - 7.5
pKa（25℃）： 6.76
分子量：302.37克/摩尔

用作：

阳离子交换色谱中的缓冲液

磷酸纤维素色谱中的缓冲液以纯化微管蛋白

注意事项：当用于阳离子交换色谱时，由于其较大的离子强度和浓度对pKa的依赖性，应以较低的浓度使用。

9）TAPS缓冲区

pH范围：  7.7 - 9.1
pKa（25℃）： 8.40
分子量：243.28克/摩尔

用作：

平面色谱中的缓冲液以分离染料

离子交换色谱中用于酶纯化的缓冲液

10）Tris缓冲区

pH范围：  7.5 - 9.0
pKa（25℃）： 8.06
分子量：121.14克/摩尔

用作：

在阴离子交换色谱中用作缓冲液和洗脱液

由于离子迁移率低，在毛细管电色谱中用作缓冲液