慢病毒过表达效果差?
在我们用LV进行过表达时,常出现以下2种情况:
1) 目的细胞无荧光信号但平行293细胞有信号。出现这种情况最可能的原因为目的细胞不易感,属于难感染细胞,建议适当加大病毒量再尝试。
2) 目的细胞有荧光但目的基因表达无增强。说明转染没问题,且荧光启动子正常工作,若目的蛋白与荧光蛋白是否为同一启动子,包装前可做启动子活性筛选;另外,考虑目的蛋白是否对细胞有毒性,使得目的蛋白被细胞降解。
另外,对于过表达效果差的一般处理办法,可采取:提高病毒滴度、更换载体、避免基因反馈(细胞适应)、以及采用诱导表达的方式。
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