在不同分析中鲁米诺发光体系的作用
鲁米诺由于具有量子产率高、易合成、水溶性好等优点,已成为应用zui广泛的化学发光试剂之一。它的发展历程就和人的艰苦历程一样,由开始的认识不多,到现在的发光发热,只能用一句话总结:是金子总会发光。往后可能会有更多我们不知道的用途来造福我们的生活。我们只要更多的了解它才能早日发掘它的无限潜力。
在无机物分析中的应用
利用无机离子能增强或抑制鲁米诺体系的化学发光,可对这些金属离子进行测定,值得指出的是,某些金属离子与配位剂结合后,具有比金属离子更高的催化活性。如利用鲁米诺-H2O2-邻菲啰啉银体系,测定银离子的检出限达到2.7×10-g/L3。
使用增敏剂可提高检测的灵敏度。三苯甲烷类衍生物对鲁米诺发光体系的增敏作用,发现考马斯亮蓝G250对luminol-H2O2-Cu2+体系有好的增敏效果,并采用反相流动注射技术,建立了测定Cu2+的新方法,检出限为1.5μg/mL。利用表面活性剂的局部浓集效应实现胶束增敏,在发光分析中的应用日益增多。如利用反相胶束体系FIA法测V4+,检出限为0.05ng/mL;采用鲁米诺-钒钼杂多酸体系测水样中的磷,使用表面活性剂增敏,可使检出限降低5倍,达到0.02μg/L。
在有机物分析中的应用
利用有机物对鲁米诺发光体系的促进、抑制作用,可实现对有机物的分析测定。使用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)、N-氯代丁二酰亚胺(NCS)为氧化剂,采用FIA技术不仅测定了自来水和井水中的NBS、NCS,还基于阳离子表面活性剂抑制鲁米诺-NBS(NCS)化学发光的性质,建立了测定阳离子表面活性剂的新方法。
一般抗氧化剂会抑制鲁米诺的化学发光。采用FIA技术,考察了不同抗氧化剂对鲁米诺-活性氧(超氧阴离子O2-、羟基自由基OH-、过氧亚硝酸盐、H2O2、CIO-)发光反应的抑制作用。基于抗氧化剂对luminol-H2O2体系的抑制,结合HPEC技术,测定了植物萃取液中的自由基清除剂,该方法的改进使灵敏度提高了4倍。潜在的抗氧化剂半胱氨酸对luminol-H2O2-Co2+体系具有促进作用,而谷胱甘肽具有抑制作用,但是对鲁米诺-过亚硝酸盐体系,二者均有增敏作用,基于这些性质建立了测定半胱氨酸和谷胱甘肽的新方法。
在免疫分析中的应用
化学发光分析的另一个主要用途是免疫分析。将发光试剂或增敏剂分子标记到抗原或抗体上,进行酶、抗原或抗体测定的化学发光免疫分析法,具有安全无污染、标记物稳定、快速、灵敏度高等优点。
具有较高发光效率的自由态鲁米诺常被用于酶标记的免疫分析中,利用酶标记增敏鲁米诺的发光反应已用于血管内皮生长因子、睾丸甾酮等测定。将半抗原用二茂铁标记后,利用其对luminol-H2O2-二茂铁电致化学发光反应的抑制作用,测定了半抗原等小分子,将HRP标记到与脂质体结合的抗体上,发现其催化鲁米诺发光的活性比HRP直接标记到抗体上高125倍。
鲁米诺化学发光分析在各个领域都得到了广泛应用,新的方法、新的技术不断涌现,特别是与FIA、HPLC等技术的联咒,克服了发光分析选择性差的缺点,使分析更加灵徽、准确。因鲁米诸性能稳定、价格低廉,实际应用研究分析将会有更为广阔的应用前景。