慢病毒包装是什么？慢病毒包装实验原理及步骤

慢病毒包装实验原理

慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装shRNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。

图 慢病毒包装过程

慢病毒包装实验步骤

NO.1

293细胞铺六孔板:提前复苏293T，在细胞长满后，细胞消化，计数并转移细胞至六孔板中，每孔约60-80万个，放于细胞培养箱中培养。

NO.2

观察细胞状态:镜下观察细胞贴壁并长至六孔板的60％以上时，换成无双抗的含10％FBS的DMEM。

NO.3

准备目的质粒，辅助质粒，lip3000及p3000，opti-MEM培养基。

NO.4

取两个无菌1.5mlEP管:1号管加入opti-MEM 125微升，lip3000 3.75微升。2号管加入opti-MEM 125微升，p3000 5微升，按照目的质粒:辅助质粒（PSPAX2:PMD2G）=4:3:1的比例将质粒DNA加入2号管，DNA总量为2.5微克。

NO.5

将管1和管2液体混匀，静置15min后逐滴滴入六孔板中，放回细胞培养箱中即可。

NO.6

12h以后弃去第一次培养基上清，记录此时时间为0h，24h以后吸取培养基，此为第一次病毒液，48h之后收第二次，此为第二次病毒液。所收两次病毒液混合，0.45微米滤器过滤即为包装好的慢病毒。