腺相关病毒浓缩流程
1) 10,000 g 离心去除细胞碎片,将离心上清转移到一个新离心管中。
2) 将两次收集的上清混合在一起,用 0.45um 滤器过滤除杂质
3) 加入 1/2 体积的 1M NaCl,10% PEG8000 溶液,混合均匀,4度过夜
4) 12,000 rpm 离心 2h,弃上清,病毒沉淀用适量的 PBS 溶液溶解,待完全溶解 后 用 0.22um 滤器过滤除菌。
5) 加入 Benzonase 核酸酶消化去除残留的质粒DNA(终浓度为50 U/ml)。合上 管盖,颠倒几次以充分混合。在37 °C 孵育30 分钟;
6) 用 0.45 μm 过滤头过滤,取滤出液,即为浓缩的AAV病毒。
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