腺相关病毒浓缩流程

1) 10,000 g 离心去除细胞碎片,将离心上清转移到一个新离心管中。

2) 将两次收集的上清混合在一起,用 0.45um 滤器过滤除杂质

3) 加入 1/2 体积的 1M NaCl,10% PEG8000 溶液,混合均匀,4度过夜

4) 12,000 rpm 离心 2h,弃上清,病毒沉淀用适量的 PBS 溶液溶解,待完全溶解 后 用 0.22um 滤器过滤除菌。

5) 加入 Benzonase 核酸酶消化去除残留的质粒DNA(终浓度为50 U/ml)。合上 管盖,颠倒几次以充分混合。在37 °C 孵育30 分钟;

6) 用 0.45 μm 过滤头过滤,取滤出液,即为浓缩的AAV病毒。

(0)

相关推荐

  • 印度3月29日疫情相关报告-突破千例

    截至周日,全球冠状病毒感染病例总数已超过69万,与冠状病毒相关的死亡人数超过33034人.在印度,确诊的冠状病毒病例总数已达到1024例,迄今已有27人死亡(印度卫生部数据). 与此同时,全国范围内对 ...

  • 雪上加霜!导管相关血栓遭遇血流性感染

    患者51岁,因左肺上叶腺癌化疗需要于本次入院12天前安置右上臂输液港. 入院2天前,患者出现右上臂输液港处皮肤发红.皮温增高.疼痛不适,按压无波动感,无畏寒.发热不适.1天前,患者出现发热,最高体温3 ...

  • 我的年初二!

    这是我的年初二 2020年一月二十六号,是大年初二又称之为迎婿日,在这一呢出嫁的女儿要回娘家,夫婿要同行,所以俗称迎婿日. 回家时要携带礼品,名为带手或伴手.大年初二,出嫁的女儿会带着丈夫及儿女回娘家 ...

  • 如果新冠病毒再持续两年世界将会怎么样?

    一,新冠病毒再持续两年,疫情防控就会常态化,医院就会多一个独立的发热门诊,就像普通科室一样运转,将会消耗大量的口罩.手套.隔离衣等防护用品及相关物资,那么相关生产企业的行情会持续走高. 二,就目前的趋 ...

  • 腺相关病毒纯化流程

    腺相关病毒属微小病毒科( parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒.AAV 的基因组约 4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由 145 个核苷 酸组成的2 个反 ...

  • 重组腺相关病毒包装构建流程

    重组腺相关病毒(Recombinant Adeno-associated Virus, rAAV)是一种功能强大.用途广泛的病毒类载体.AAV属于微小病毒科.依赖病毒属的单链DNA病毒,其基因组大小约 ...

  • 腺相关病毒包装收毒流程

    病毒颗粒同时存在于包装细胞和培养上清中.可以将细胞和培养上清都收集下来以获得最好的收率.1) 准备一个干冰乙醇浴(将乙醇倾入装有干冰的泡沫盒即可,也可用液氮替代干 冰乙醇浴)和37°C 水浴: 2)  ...

  • 腺相关病毒在体自噬流检测

    细胞自噬(autophagy or autophagocytosis):又称为Ⅱ型细胞死亡,是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene,Atg) 的调控下利用溶酶体降解自身受损 ...

  • 腺相关病毒神经形态学应用

    神经系统是哺乳动物最复杂的器官系统,组织结构和细胞种类极其丰富.腺相关病毒对神经系统的高亲和力,同时通过使用各细胞种类特异启动子(Syn,CaMKII,GFAP,TH......)结合各种荧光标记的使 ...

  • 腺相关病毒技术服务介绍

    腺相关病毒(Adeno-Associated Viral Vector,AAV)属于微小病毒科( parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒.AAV 的基因组约 4700bp,包括上下游 ...

  • 腺相关病毒在心脏中的应用

    AAV的多个血清型对心脏都有很好的亲和性.可以通过尾静脉注射.颈静脉注射和心肌原点注射等方式在体注射AAV感染心脏.大量的动物实验和临床实验研究表明通过携带治疗基因,AAV对心血管疾病如心衰和心肌肥大 ...

  • 腺相关病毒(AAV)简介

    腺相关病毒属微小病毒科( parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒.AAV 的基因组约 4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由 145 个核苷 酸组成的2 个反 ...

  • 腺相关病毒(AAV)优点

    腺相关病毒属微小病毒科( parvovirus),为无包膜的单链线状 DNA 病毒.AAV 的基因组约 4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由 145 个核苷 酸组成的2 个反 ...