H11位点基因敲入大鼠构建技术原理及流程

Rosa26是一个经典的基因插入位点，虽然对于Rosa26位点的研究较多，但制作多基因插入小鼠时仍需要其他合适的插入位点。H11（Hipp11）是另一个可供选择的插入位点，也是一个安全区域，在此位点的插入基因不会影响其他基因表达，同时此插入基因的表达也不会受到周边区域的影响。

H11位于大鼠 11 号染色体，是位于Eif4enif1与Drg1两个基因之间的一个位点，于 2010 年由 Hippenmeyer S.发现，整合到 H11 位点的外源基因可以稳定高效的表达。利用Crispr/Cas9基因编辑技术，可将外源的基因片段定点插入到大鼠的H11位点。与Rosa26相比，其优点是不受旁侧启动子影响，因此更合适用于表达外源基因。结合loxp系统，可构建组织特异性表达大鼠模型。

构建原理图：

构建流程：

技术优势：

1. 稳定性高，后代表达一致；

2. 实用性强，能实现A基因在Rosa26位点及B基因在H11位点同时过表达；

3. 经济实惠，F1代即可开始实验。