细胞冻存液的主要成分和配方是什么？

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。

伴随着科技进步持续的发展趋势，医学技术也在持续提高。前两年冷冻人的恶性事件让全球眼前一亮，原先不仅是食材能够冷藏储存，就连身体也可以冷藏储存。假如要想做到那样的目地，那麼就需要体细胞冷冻液，这类东西如何配备呢?下边就来实际的了解一下，细胞冻存液的成分是啥？

细胞冻存常用冻存液的成分如下：

20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。

细胞冻存液的操作步骤：

1. 配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的冻存细胞培养液;

2. 取对数成长期的体细胞，除去旧细胞培养液，用PBS清理。

3. 除去PBS，添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来;

4. 抽滤1000rpm，5min;

5. 除去蛋白酶，添加适量配置好的冻存细胞培养液，用塑料吸管轻轻地吹打使体细胞匀称，记数，调整冻存液中体细胞的最后相对密度为5牙周106/ml～1牙周107/ml;

6. 将体细胞分装进冻存管中，每管1～1.5 ml;

7. 在冻存管上标出体细胞的名字，冻存時间及作业者;

8. 冻存：标准的冻存程序流程为减温速度-1～-2℃/min;当溫度达-25℃下列时，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可快速渗入液态氮中。也可将配有体细胞的冻存管放进-20℃电冰箱2h，随后放进-70℃电冰箱中留宿，取下冻存管，移进液氮容器内。

常见问题

常见问题：

1.从繁衍期到产生高密度的单层细胞之前的塑造体细胞都能够用以冻存，但最好是为多数成长期体细胞。在冻存前一天最好是换一次细胞培养液;

2.将冻存管放进液氮容器或从这当中取下时，要搞好安全防护工作中，以防冻伤;

3.冻存和再生最好用新配置的细胞培养液。