几十毫克的样品如何快速分离？

几十毫克样品如何分离纯化呢？现实情况，实验室大家用的比较多的方法是刮大板，能老老实实过根柱子真的不多。但刮大板经常被一些大牛认为是投机取巧、偷懒的分离方法。在绝大部分paper上都不会说自己用了爬大板这种分离方法。所以，过柱子的基础方法还是必须掌握的，先打好基础，不急不燥，一步一个脚印。

分离几十毫克的样品要用到小型的色谱柱微柱，因为溶剂的添加量很少，可以快速运行，既简便又环保。如果混合物成分的TLC Rf相差超过0.20 ，还能分离多达125 mg的混合物。

使用微柱要想获得良好的分离效果，理想的情况是目标组分的Rf大约为0.35，并且与其他杂质的Rf至少要相隔0.2 单位。如果要分离的点非常近（ ΔRf<0.2），最好是中间的点RF为0.35。Rf 接近0.35是最理想的，因为它足够慢，可以进行固定相-流动相平衡，但是要足够快，以最小化扩散引起的谱带展宽。

视频教程

操作步骤：

1、用少量棉花塞入玻璃胶头吸管，使用木棒轻轻将其压实。注意不要装过多的棉花或塞得太紧，只需防止硅胶泄漏出去即可。

2.加入230-400目干燥的硅胶，然后将其夯实，在顶部留下4-5 cm的空间用于添加溶剂。将己烷（或该程序指定的其他溶剂）添加到硅胶顶部预洗脱。

3.上样（湿法和干法）

（1）湿法需要将纯化的样品溶解在少量溶剂中（最好是洗脱液）中，例如己烷，丙酮或其他溶剂。如果固体不溶于洗脱液，请使用最少量的二氯甲烷。并小心地添加样品，以免将化合物溅到壁上。如果使用湿法上样，则仅需使用几滴溶剂即可。如果使用过多的溶剂，则上样的溶剂会干扰洗脱，从而干扰混合物的分离。

样品进入色谱柱后，将新鲜的洗脱溶剂添加到顶部，即可开始洗脱过程。

（2）对于干法，首先将要样品溶于最少量的溶剂中，然后加入约100 mg硅胶。旋转混合物，直到溶剂蒸发，仅剩下干粉。

将干粉放在折叠的称重纸上，并将其转移到管的顶部。

在顶部加入新鲜的洗脱溶剂就可以开始洗脱了。

4、当化合物洗脱时，顺序收集大小相等的馏分，如果混合物难以分离，最好每个试管收集小部分。

5.将馏分依洗脱顺序排列在试管架上。使用TLC确定馏分的纯度，并合并适当的馏分。用旋转蒸发仪除去溶剂。