构建高产细胞株的基本步骤

转染-筛选-扩增-单克隆化-筛选-驯化

首先，通过质粒将目的蛋白的编码基因导入到细胞内。质粒上除了目的基因外还带有抗性基因，比如抗生素抗性基因。这样在转染后就可以利用选择压力富集整合质粒的细胞。在哺乳动物细胞中质粒不能进行复制，未整合到基因组中的质粒随着细胞分裂逐渐丢失。在一段时间的选择压力后，所有存活下来的细胞基因组中都整合了外源质粒。

获得了一系列整合了外源基因的稳定细胞后，接下来就需要从中筛选出表达量最高的克隆。最常用的方法是检测96孔细胞培养板中蛋白的浓度；另外一个方法是让细胞在软琼脂上生长形成集落，然后利用原位免疫沉淀技术获得高产细胞。近年来，发展起来的高通量自动化筛选技术也被受关注。