逆转录病毒包装实验步骤

逆转录病毒是一类RNA病毒，需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA，再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。

逆转录病毒的许多特点使其成为基因转移载体的上佳选择。最重要的一点是它可以有效的整合入靶细胞基因组并稳定持久地表达所带的外源基因。病毒基因组以转座的方式整合，其基因组不会发生重排，因此所携带的外源基因也不会改变。

逆转录病毒包装步骤：

10cm大皿接种5×10⁶个Plat-E细胞，加入10ml含10%FBS的DMEM培养基过夜，12h后显微镜下观察细胞密度80%-90%为宜。15ug目的质粒和500ulOpti-MEM培养基混合，同时45ug 转染试剂和500ulOpti-MEM培养基混合，5min后转染试剂Opti-MEM加至质粒Opti-MEM中，静置20min，将混合物滴入Plat-E细胞中混匀，37℃5%CO2培养箱中培养，8-10h后更换新鲜DMEM培养基。转染48h，72h后收集病毒上清，0.44um滤器过滤-80℃保存。