条件性基因敲除小鼠繁育方案

重点:获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠(f/f;Cre-)× (f/+;Cre+) → f/f;Cre+

Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后(CRISPR/Cas9 途径获得的 CKO 小鼠省略此步骤),获得仅含有两个 loxP 位点的 flox 杂合子小鼠(flox/+,可缩写成 f/+)。 flox 杂合子(f/+)小鼠与组织特异性或诱导型 Cre 阳性(Cre+)小鼠交配,获得 flox 杂合同时带有 Cre (f/+;Cre+)的小鼠,再与 flox 杂合子(f/+)交配,这样最终可以获得1/8的 flox 纯合且带有 Cre 的条件性基因敲除小鼠(f/f;Cre+)。

是不是觉得1/8的比例太低了?那可以用下面的方法,轻轻松松将效率提高一倍。很简单,在繁育 f/+;Cre+的同时,繁育 flox 纯合子(f/f),再将这两种小鼠相互交配。这样,就可以获得1/4的 f/f;Cre+ 敲除小鼠啦。

最后,资深达人才知道的小贴士:

在设计繁育路线、估算繁育规模的时候,有几个系数会帮助你更顺利地获得足够数量的实验组与对照组:

估算公式:

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