KI小鼠构建技术原理及流程

基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型) ；或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟 踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。

应用

1、用于药物筛选相关研究；

2、用于信号通路的研究；

3、用于示踪的相关研究。

建系原则与流程

1、嵌合体小鼠鉴定：通过毛色判断嵌合体（黑白相间） ，黑色占的比例越大，嵌合率越高。

2、去除抗性基因 Neo：嵌合体小鼠和Flp deleter小鼠杂交，PCR鉴定，获得去掉打靶载体中的 Neo 基因的F1 代（杂合子）；

3、挑选一对F1 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除Neo的纯合子的 F2 代 KI 小鼠。

**PCR 鉴定引物设计原则：根据Neo基因前后设计鉴定引物，鉴定Neo基因是否去除。