β-actin居然可以两条带？！（片尾有彩蛋哦^_^）

身为内参界的大腕，β-actin凭借稳定单带的优点集万千宠爱于一身！

然鹅，万万没想到，β-actin也有“掉链子”的时候！那出现两条带的beta-actin究竟对不对呢？

我们先来看下面这两个 β-actin的检测：

（图片来源于网络）

第一个图中一条带的 β-actin 的正确性是毋庸置疑的，但是第二个图中actin俨然不止一条带。我们先来看看这个问题是否普遍存在：

作为内参的 β-actin多条带问题这么普遍，那究竟是什么原因呢？

原来科学家们发现，有很多酶都可以降解actin（由于不同actin亚型序列差别不大，所以下面统称actin。这一系列酶的种类多得超乎你想象！

除了这些酶的作用，在有些特殊的刺激下，比如凋亡，actin也会降解！

咱们熟悉的42 kDa的actin，发生降解后会产生35-38 kDa、~30 kDa, 15 kDa等典型片段来，其中35-38 kDa的片段最为常见，这是因为不少酶都会在Val43和Met44这两个氨基酸中间切开它，也就是下面这个意思：

综上所述，如果actin出现多条带，建议从以下几个方面考虑解决：

1. 像上面提及的凝血酶、组织蛋白酶等在各组织里和细胞里的分布比较广泛，在裂解过程中它们极有可能是降解actin的主要因素，因此需要设法抑制蛋白酶活性，比如引入蛋白酶抑制剂、避开蛋白酶最适活性温度等；

2. 对于贴壁细胞，在传代过程中使用的胰酶也是一个潜在威胁，在传代的时候需要控制好消化时间，防止消化过度，尤其是在最后一次传代时，细胞密度尽量传低，以充份稀释残留的胰酶，同时提高未被降解的细胞的比例。

3. 保持细胞处于良好的状态，防止发生凋亡。对于研究凋亡的童鞋来说，可以考虑用其它内参。

4. 防止细胞被微生物污染、防止裂解产物被微生物污染，提蛋白的全部器皿尽可能干净无微生物污染。（关于提取蛋白的更多细节建议参考我们关于蛋白抽样的推文）

但是，针对富含大量蛋白酶的组织（如消化系统组织）和细胞（如U-937, Raw264.7等细胞），即使用了上述方法，依然有较大可能出现actin被降解的可能。那怎么办？

不用担心，Proteintech已经完美解决这一问题！

我们来看看Proteintech的两支 β-actin单抗：

Proteintech的60008-1-Ig可以识别出一条降解片段来，但是66009-1-Ig只能测出全长来，原因就是66009-1-Ig识别的位点位于前43aa内。

所以，当实在无法解决beta-actin出现降解条带但又需要漂亮图图的，如果确认目的蛋白不受降解影响或影响极小的，可以考虑采用Proteintech 的66009-1-Ig来解决。

另外需要注意的是，N端的序列在物种间的保守程度不如C端，因此Proteintech 的 β-actin抗体60008-1-Ig可以识别更广泛的物种，最低可以识别酵母actin， 而66009-1-Ig只能识别线虫或更高等的动物。

为了方便大家选择产品，我们顺便把这两个产品的对比列出来：

（注意：60008-1-Ig亚型为IgM，不适合做IP实验。）

怎么样，WB要重做的理由又被K.O了一个，有木有很开心？

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