鲁米诺在蛋白印迹中的应用

鲁米诺luminol，也叫发光氨，可以检测处极少量的过氧化氢，通常作为过氧化物酶的底物用于各类生化检测，灵敏度非常高且易于自动化，其中蛋白质印迹WB实验就经常使用鲁米诺制成的ECL发光液。

在蛋白质印迹法（Western Blot）即蛋白质免疫印迹试验，使用的ECL发光液就是由鲁米诺制作而成的。鲁米诺发光免疫分析通常是Western Blot的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以通过发光来观察实验结果。这里的发光液A和B分别就是由鲁米诺和过氧化氢制成的溶液。

ECL发光液原料鲁米诺luminol

蛋白免疫印迹是将细胞或组织总蛋白质进行电泳分离后从电泳凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。目标蛋白HRP酶标记后，就可以通过鲁米诺发光进行观察检测。

蛋白质印迹Western Blot与DNA印迹杂交Southern Blot或RNA印迹杂交Northern Blot杂交方法类似，但WB法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物或印迹的对象是蛋白质。蛋白或多肽样品经过PAGE分离后转移到载体硝酸纤维素薄膜上，固相载体以非共价键吸附蛋白质且保证活性，蛋白质作为抗原与抗体反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

当然WB实验除了用鲁米诺ECL发光液检测以为，还可以用其他显色方法，比如底物DAB显色或者新型Trinder’s试剂酶联免疫分析