单胚胎移植的关键：胚胎选择

IVF-ET的临床实践中，胚胎质量好坏是影响妊娠结局的关键因素之一。选择最具有发育潜能的优质胚胎进行移植是保证妊娠成功的前提，但如何在不损害胚胎的前提下准确判断胚胎的发育潜能，一直是IVF-ET技术面临的最具挑战性的问题。因此，正确判断和选择具有良好发育潜能和高种植率的胚胎用于移植成为胚胎学家关注的焦点。今天生殖青年小崔就一些常用的胚胎筛选方法为大家进行一个简单的介绍。

传统的胚胎形态学评分

胚胎形态学评估是一个连续的动态的过程，主要包括卵母细胞、原核、早卵裂、卵裂期及囊胚期。目前认为理想的成熟卵母细胞胞浆清亮、均质，细胞质颗粒均匀清晰、无空泡、碎片、无颗粒状暗区，极体呈圆形或椭圆形、表面光滑，卵周隙小，透明带清晰，卵母细胞质量对其后胚胎发育至关重要

不同时期胚胎学家在倒置显微镜下观察的内容主要有：①胚胎的受精情况（DAY1）；②卵裂球的数目、大小及对称性（DAY2,DAY3）；③囊胚的滋养层及内细胞团情况（DAY5,DAY6）。

传统的形态学评分为胚胎学家提供了一种简单、有效、动态的胚胎评估方法。但是，传统的形态学评分也有其不足之处，例如：间断观察，会错过胚胎的动态变化过程；观察时需将胚胎从培养箱中取出，增加了胚胎暴露的时间；评分具有一定的主观性等等。因此，传统的形态学评分对于胚胎学家筛选最具发育潜能的胚胎有极高的要求。

时差监视系统

时差监视系统是近年来发展起来的一门新技术。它为胚胎学家筛选胚胎提供了更加丰富的形态学变化和胚胎发育的动态数据。什么是时差监视系统呢？就是将显微镜及照相系统安装到培养箱中，每间隔十分钟左右观察一次胚胎的培养系统。这是一种不间断的、非侵入性的胚胎观察系统，从受精到囊胚形成的全过程,胚胎都无需从稳定的培养系统中取出，确保了培养环境的稳定,也为我们挑选胚胎提供了大量的客观数据。

胚胎植入前遗传学筛查

PGS(preimplantation
genetic diagnosis)即植入前遗传学筛查。是利用基因芯片或二代测序等技术对体外受精的胚胎在囊胚期抽取4-6个细胞，对早期胚胎进行染色体数目和结构异常的检测，通过一次性检测胚胎23对染色体的结构和数目，分析胚胎是否有遗传物质异常的一种早期产前筛查方法。从而挑选整倍体胚胎植入子宫，助于提高胚胎活产率，减少流产率。

健康胚胎是成功妊娠的关键。而通过体外受精方法获得的胚胎有50%左右存在染色体异常，且孕妇年龄越大，胚胎染色体异常的风险越高。胚胎染色体非整倍体率的增加是引起早期胚胎死亡，造成IVF-ET成功率低和流产率高的一个主要原因。非整倍体即在正常二倍体基础上，染色体数目增减一条甚至多条，由于染色体数目发生变化，等位基因失衡引起等位基因产物减半或增倍，可导致胚胎停止发育，自发流产、死产。与传统按照形态学标准挑选胚胎进行移植，PGS可直接对胚胎的遗传物质进行分析，准确判断胚胎是否存在染色体异常，筛选出真正健康的胚胎。有临床试验数据显示，PGS可将接受辅助生殖治疗的反复流产人群的流产率从33.5%降低至6.9%，同时将临床妊娠率从依赖形态学的45.8%提高至70.9%。另外，利用PGS技术选择健康胚胎，还可以避免因盲目的移植多个胚胎而导致多胎妊娠的发生。

胚胎代谢组学分析

低分子量代谢物作为细胞调控进程中的最终产物，处于基因功能链下游，可以揭示生物系统对遗传、营养及环境因素改变的应答，更快速地反映细胞活力。因此，可以通过测量相应胚胎代谢产物来评估胚胎发育质量。

早期对胚胎代谢活动非侵入性定量化研究主要是分析某几种明确的代谢物，目前该领域已将目标转移到整个代谢谱，即对特定生理阶段或发育期细胞中所有低分子量化合物(相对分子量<1 000)的动态定量分析。一项回顾性研究应用高效液相色谱法检测了53个ICSI周期的胚胎培养液，结果检测到了3个氨基酸(天冬氨酸、
甘氨酸和亮氨酸)含量的变化与临床妊娠率或活产率密切相关。更重要的是，这种氨基酸的变化对妊娠结局的预测独立于孕妇年龄、卵巢退化、胚胎数目及胚胎形态学分级等因素, 是一个重要的预测指标。

还有学者用气相色谱分析植入前胚胎中脂肪酸的代谢情况显示，与4-细胞以下胚胎相比, 4-细胞以上的胚胎不饱和脂肪酸浓度升高, 饱和脂肪酸浓度降低。
提示了解植入前胚胎对脂肪酸的需求, 可以采取措施改善IVF成功率。
最近, 近红外光谱分析引入了培养基代谢分析。一项多中心参与的前瞻性研究应用近红外光谱技术观察到,人类胚胎培养基中代谢物化学结构与妊娠率相关。
该研究分析了胚胎第3日移植后的培养基, 结果显示培养基中 -CH、 -NH 及 -OH浓度可提示妊娠结局, 其中-CH和-OH与氧化应激有关; 而另一项研究则肯定了培养基、卵泡液和精浆中 -CH、 -NH及-OH 氧化应激变化对妊娠结局的影响。

还有专家通过应用近红外光谱技术与遗传优势算法结合, 建立了一套培养基中代谢谱的生育指数模型, 结果显示即使形态学评估处于同一等级的胚胎, 生育指数高的胚胎(生育指数>0.3)临床结局明显优于生育指数低的胚胎。除了化合物, 还有学者用氧气消耗量来分析胚胎代谢活动。

有胚胎学家建立了Nanorespirometer系统, 以氧气消耗量来定量分析胚胎代谢情况, 以此评估胚胎发育状态。该技术敏感度高、非侵入性, 能在胚胎发育的特定时段测量胚胎呼吸率, 而不会对胚胎产生不良影响。以此技术为基础, 专家们又设计了更为先进的胚胎呼吸测量仪, 可以对胚胎呼吸情况进行连续测量,同时还能采集整个培养期间每个胚胎呼吸的数字化图像。由于基因表达的异常, 通过转录和翻译阶段的级联放大而形成的细胞生理学改变, 很容易通过代谢物检测被显示, 因此代谢物作为细胞调控的终产物,更能反映细胞活力。目前代谢物分析方法的最大缺陷在于: 现有技术平台只能分析有限的代谢物指标。只有大量代谢物指标可以同时测量时, 该分析方法的预测价值才能全部体现出来。

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