HE染色实验注意事项
一、pH值的调节
如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
二、分色时间的控制
分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行,一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅,应重新染色后再行分色。
三、酒精脱水应彻底
切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,更换酒精、二甲苯,以求彻底脱水与透明。 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前,切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
四、避免切片干燥
在染色过程中不要让切片干燥,以免切片收缩、变形,影响神经元形态。
五、避免切片污染
出现切片污染,污染物遮盖该部位的细胞或组织难以观察期形态改变。应定期过滤各种染液和试剂以避免其中的沉淀物所引起的污染。
六、避免脱蜡不完全
冬季室温低时(14℃以下),二甲苯应在水浴缸中适当加温到30℃后再脱蜡,以避免因脱蜡不完全引起的染色不均匀呈雾化状态。
七、封片注意事项
最后封固时,要用中性树脂,防止日后褪色,盖片要选大于组织块的面积,如漏出一部分不久将会褪色,所用树脂浓度要适当,树脂封固时不能有气泡。
赞 (0)