可诱导性/组织特异性转基因大鼠构建技术原理
与小鼠相比,大鼠体型较大,其生理学特征易于研究,是多种人类疾病的重要模式动物。
大鼠是研究生理学的理想模型,研究者已经得到了大量的纯系大鼠,并且在大鼠的行为、细胞、生理、生化、药理和毒理学方面积累了大量的数据;大鼠还是研究人类高血压、糖尿病、乳腺癌和神经系统疾病的理想动物模型。大鼠在形成乳腺癌等肿瘤时的激素反应和人非常相似。从某种程度上说,大鼠是目前最适合的人类疾病动物模型之一,是可以将基因组和功能结合起来的动物模型。
大鼠同时也是药理学研究的首选动物,并且被广泛应用于心血管疾病、运动疾病的研究领域。大鼠可以用来模拟几乎所有已知的人类疾病,了解大鼠的遗传结构将帮助研究人员发现与疾病相关的基因,从而更加清楚地认识基因以及环境对人类的健康造成的影响。大鼠一直广泛应用于药物的效力以及安全性测试工作,对大鼠基因组序列的了解,将为药物干涉提供新的目标,这将对新药的研制产生巨大的推动作用。
制作转基因大鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内,注射DNA整合到大鼠受精卵的基因组中,并稳定遗传给后代。 使用PiggyBac系统DNA显微注射,制备的转基因鼠基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上!
可诱导性/组织特异性转基因大鼠
将构建的广泛表达启动子-lox-stop-lox-转基因载体通过显微注射制备组织特异性,转基因在正常转基因大树模型情况下并不表达, 只有与相应的组织特异性表达Cre/CreERT2小鼠杂交后,因Stop终止序列在特定的组织中被去除,从而达到转基因在诱导性/特定组织中特异性表达 的目的。
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