烧伤瘢痕脂肪移植通过对瘢痕和脊髓的抗炎作用减轻神经病理性疼痛 4 身材总监烫伤压力衣定制
图4。脂肪移植增加p-IκB，降低p-NFκB蛋白，并通过抑制p-JNK，减轻脊髓背角细胞凋亡。
（A） 免疫荧光双重染色检测p-IκB和p-NFκB，C组p-IκB蛋白表达较少，与C组相比，D组p-IκB表达减少，p-NFκB表达消失。（B）TUNEL阳性细胞增多后，p-JNK和TUNEL的双重免疫荧光图像升高。在D组，我们发现p-JNK在脂肪移植中的抑制作用减弱了脊髓背角的凋亡。
脂肪移植降低脊髓背角p-AKT/AKT和Bax/Bcl-2比值
westernblotting检测p-AKT/AKT和Bax/Bcl-2的表达。以42kbβ-actin的表达作为负载对照。与C组相比，D组的p-AKT/AKT和Bax/Bcl-2比值均显著降低。还观察到Bax下游脊髓背角凋亡过程的增加（图5）。图5。脂肪移植物调节脊髓背角p-AKT/AKT和Bax/Bcl-2比值。
（A和B）C组p-AKT/AKT和Bax/Bcl-2的表达率均显著高于D组。这些结果表明，脂肪移植减少了脊髓神经元的细胞死亡（数据用平均值±SEM表示，**p<0.01；*p<0.05）。
讨论
脂肪移植减轻烧伤引起的神经病理性疼痛或创伤性疼痛瘢痕已有报道，但脂肪移植治疗神经病理性疼痛的机制尚不清楚。在这项研究中，我们已经证明脂肪移植是一种有前途的方法来减轻烧伤引起的神经病理性疼痛，脂肪移植减少皮肤炎症和脊髓神经炎症进一步减少神经细胞凋亡。此外，脂肪移植还降低了烧伤皮肤和脊髓背角炎症蛋白的表达，如iNOS、nNOS、COX-2。Ipaktchi等人报道烧伤会引起局部过度炎症并产生炎症细胞因子。此外，烧伤伤口及其愈合过程可引起炎症介质和细胞，如辅助性T细胞和巨噬细胞。在伤口愈合过程中，促炎介质，如TNF-α、TGF-β和白细胞介素家族高度上调。因此，炎症是伤口愈合的一种生理现象，可能持续12个月以上，直到疤痕成熟。炎症和神经损伤诱导背角神经元的转录改变和COX-2的诱导。这会导致烧伤疤痕神经性疼痛，如果炎症持续存在，还会导致脊髓第二次坏死和凋亡。除了COX-2的炎症诱导导致前列腺素释放和局部疼痛超敏反应外，这种局部炎症还通过增加中枢神经系统（即脊髓）的神经元兴奋性而导致未损伤区域的疼痛。Samad等人证明，在完全弗氏佐剂诱发的后足炎症模型中，后足皮肤产生COX-2mrna的高表达，腰椎脊髓也产生类似的高表达。IL-1β信号的抑制阻止了COX-2基因的转录上调，减少了机械性痛觉过敏，并使疼痛敏感性正常化。促炎细胞因子IL-1β和TNF-α是炎症过程中的关键细胞因子，可降低机械性痛阈。此外，促炎细胞因子拮抗剂能够减少炎症模型中的痛觉过敏，这意味着IL-1β和TNF-α的激活是产生炎症性疼痛的关键步骤。结果表明，脂肪移植可降低皮肤和脊髓背角IHC染色和westernblot中COX-2的表达。此外，脂肪移植降低了脊髓背角IL-1β和TNF-α的水平。因此，我们认为脂肪移植通过降低IL-1β的水平来减轻烧伤引起的神经病理性疼痛，并进一步降低COX-2的表达来减轻炎症过程。iNOS和/或nNOS的过度表达或不适当的NO产生与炎症和神经病理性疼痛有关。在神经病理性疼痛动物模型中，神经或烧伤后脊髓和皮肤中的nNOS和iNOS表达上调。Payne等人证明iNOS/nNOS抑制剂在神经病理性疼痛模型中有效。在神经病理性疼痛模型中抑制NOS可减少脊髓和皮肤中iNOS和nNOS的上调。因此，iNOS和nNOS可提示神经性疼痛。Keihoff等人证明了慢性缩颈损伤（CCI）模型中神经病理性疼痛的时间过程，在野生型小鼠中，在慢性缩颈损伤（CCI）后第10天观察到神经病理性疼痛，并在第52天恢复正常。然而，nNOS基因敲除小鼠的痛阈在第6天恢复正常，iNOS小鼠的痛阈在第17天恢复正常。这是由于诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在nNOS上调中所需的调节作用。在我们的结果中，脂肪移植减轻了行为测试中的痛觉超敏，降低了IHC染色图像中iNOS和nNOS的表达，并降低了蛋白质的表达。此外，脊髓背角蛋白表达增加。这些结果表明，脂肪移植减轻了皮肤和脊髓的神经炎症反应，改善了神经病理性疼痛。NFκB是一种调节炎症和凋亡的核转录因子。NFκB信号通路的激活依赖于IκB蛋白的磷酸化和降解。MAPKs在神经元炎症反应中起着重要的调节作用。最近的一项研究表明，JNK途径介导的细胞凋亡涉及神经母细胞瘤细胞系的炎症反应。这种凋亡反应也表现在AKT的表达和Bax/Bcl-2比值的增加。磷脂酰肌醇3激酶/AKT的激活与细胞毒性细胞死亡有关，AKT抑制剂也保护培养的神经元免受光动力诱导的坏死。Bax和Bcl-2在细胞凋亡调控中起着重要作用。Bax表达降低和Bcl-2表达增加通过抑制凋亡促进细胞存活。我们的数据显示，脂肪移植可能增加p-IκB和减少NFκB的转录在抗炎作用。通过抑制星形胶质细胞中AKT和JNK的磷酸化，降低Bax的表达，增加Bcl-2的表达来减轻脊髓背角的凋亡，从而减轻凋亡。我们推测脂肪移植通过抗炎作用减轻神经痛，改善脊髓背角神经元细胞凋亡。
结论
烧伤后足趾皮下注射脂肪可明显减轻烧伤引起的神经病理性疼痛。总之，我们的结果显示，脂肪移植降低了脊髓星形胶质细胞中p-NFκB的活化，并减弱了脊髓和烧伤瘢痕中包括COX-2、iNOS和nNOS在内的炎症蛋白。因此，我们的研究结果表明，脂肪移植，由于其抗炎作用，可以作为一种创新的治疗方法烧伤引起的神经性疼痛。
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