妈呀,又白板! ——有问题,别喊妈,先自查
说好的CNS,PI,迎娶白富美,走上人生巅峰的诗和远方呢?
却一遍又一遍进入恶性循环,谁能传我神功破除魔咒啊?
少年莫捉急~我这有秘笈!
自查五步大法:
第一式——查抗体
一抗种属、应用、sensitivity有没有问题?CST内部未验证过的种属和应用,不推荐您使用。如Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb #3230 应用里只标注了IF-IC,若用于IF-P或IF-F是不行的。 又如JMJD3 Antibody #3457,transfected only,则不能用于检测内源表达的JMJD3。
第二式——查样本
确定所用的细胞/组织中表达您的靶标蛋白么?表达丰度如何?
查阅以下数据库:
www.biogps.org 通过mRNA表达水平给您参考估计不同样本中目的蛋白的表达水平
www.uniprot.org 了解目的蛋白可变剪切体、蛋白表达位置、可修饰类型等
www.phosphositeplus.org 蛋白质翻译后修饰权威数据库,查阅修饰类蛋白的表达条件和丰度、刺激方式等
https://www.cellsignal.com/common/content/content.jsp?id=resources-controls-table CST倾心打造的阳性对照表,为您提供全面的修饰类蛋白的刺激处理方式
第三式——查说明书
CST产品说明书中都有列举出相应的配套试剂,这些都是CST科学家经过实验反复验证后的吐血推荐,保证您得到最佳信噪比的结果。
举例:
第四式——方法互证
IHC、IF实验在做染色之前,可用WB实验验证样本中是否有表达。
第五式——终极五字诀
终极WB实验步骤五字诀,字字珠玑:
样本新鲜备,细胞传久废,
抑制各种酶,cocktail新鲜配,
裂解超声碎,或者针头怼*,
取上50微,上样前煮沸。
转膜用湿转,选膜选NC,
封闭用牛奶,不用BSA,
抗体使用前,说明书详看。
白板不可怕,白了别喊妈,
问题再复杂,一步步自查。
*针头怼:指用移液枪进行上下吹打进行破碎