细胞克隆实验基本原理及方法

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。克隆形成率反映细胞两个重要性状：细胞群体依赖性、增殖能力。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

a）.初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；

b）.二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；

c）.正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法

1.平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞。

注：适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

2.软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

注：正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克隆形成试验。