Gp130点突变小鼠构建技术原理

基因敲入是基于基因重组原理，将外源基因插入生命体基因组中，并使其在体内表达的技术。基因敲入一般有两种形式：① 定点敲入：通过插入特定启动子位点来表达外源基因在小鼠基因组的安全位点插入一段表达蛋白质所需要的完整DNA序列单元：包含特定启动子，需要过表达基因的CDS区以及polyA结构来实现过表达某种蛋白质。该位点一般能保证插入基因的正常表达，且对小鼠也无副作用。例如ROSA26位点就是一个非常成熟的位点，引物、同源臂的设计都得到验证。② 原位敲入：在原基因敲除的位点插入新的基因利用小鼠自身的启动子，在原基因敲除的位点插入新的基因CDS区，一般为引入报告基因以观察启动子表达情况，如GFP。也用于点突变鼠的构建。Gp130是细胞因子IL6和IL11的共同受体，Gp130突变（Gp130F/F）小鼠在3个月内就可以发展为与人类相近的胃腺癌。由于Gp130突变会导致TFF1的表达下调，因此Gp130F/F小鼠在很多方面的表型都与Tff1-/-小鼠相似。在胃部，Gp130信号通路的主要细胞因子传递者是IL11，其过度表达不仅能够促进胃慢性炎症，还可以过度激活STAT3，进而加速肿瘤的发生。