水蛭用于改善黑眼圈或眼袋的应用、组合物及其制备方法

技术领域：

本发明属于化妆品领域，涉及水蛭用于改善黑眼圈或眼袋的应用，以及以水蛭为主要原料，用于改善黑眼圈或眼袋的组合物及其制备方法。水蛭是一味传统中药，史载于《神农本草经》，历代本草均有记述。中医认为它有破血、逐瘀通经的功能，历来用于治疗症瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤。中国药典2000年版收载为水蛭科动物蚂蟥WhitmanpigraWhitman、7jC蛭Hinudenipponicaffhitman或柳叶蚂蟥WhitmaniaacranuIataWhitman的干燥体。水蛭中主要成分有1、直接作用于凝血系统的成分，包括凝血酶抑制剂，以及其它抑制血液凝固的物质，如水蛭素(Hirudin)、菲牛蛭素 (Bufrudin)、森林山蛭素(Haemadin)等。2、其它蛋白酶抑制剂及其它活性成分，如溶纤素 (Hementerin)、待可森(Decorsin)等。3、其他成分水蛭主含蛋白质，此外含有17种氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸，还含有Si、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo、Ni等14种元素，还有吻蛭素、肝素、抗血栓素、氨基酸成分等营养成分。目前，已有较多化妆品中使用到水蛭的提取物或其主要成分水蛭素。如水蛭的提取物可用于祛斑、祛痘、润肤、嫩肤、美白、预防皮肤衰老、增强皮肤弹性之功效。由于黑眼圈及眼袋的形成原因较多，睡眠不足、疲劳、肾气虚损、精气不足均易出现黑眼圈与眼袋，而且二者常常同时出现，非常影响个人形象，但是现有方法对于改善和完全祛除黑眼圈和眼袋并不明显。现有报道中，尚未见单独应用水蛭于改善或祛除黑眼圈和眼袋的报道与应用。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种水蛭的新用途，用于改善或祛除黑眼圈和眼袋。为了更好的应用水蛭这一新用途，本发明所解决的第二个技术问题是提供以水蛭为主要原料制备的用于改善或祛除黑眼圈和眼袋的组合物。本发明组合物主要活性成分为水蛭提取物、天然水蛭素与重组水蛭素中任意一种，可选择加入珍珠、决明子、茯苓中一种或几种组成作为活性成分形成复方。本发明组合物的活性成分重量配比如下

背景技术：

水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份

0 5份。 种不为0。

0 5份 0 5份

优选重量配比为

水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素 5 25份

珍珠 1~5份

决明子提取物茯苓提取物 3~5份 本发明所采用的活性成分分别是1、水蛭提取物的常规制备方法为取新鲜水蛭全体绞碎制成水蛭浆，按体积配比 水蛭浆1份浓盐酸0. 01 0. 1份、丙酮1 10份的配料提取，取丙酮液，残渣再用丙酮浸提，过滤，合并丙酮提取液，干燥即可。2、天然水蛭素提取工艺为取新鲜水蛭唾液，加入丙酮，冷却，取上清液离心，残渣加三氯乙酸溶解，取样上柱层析(1)阴离子交换柱层析取适量DEAE-C52加蒸馏水使其膨胀，按常规方法依次用 NaOH-NaCl混合液、稀盐酸溶液及NaOH-NaCl混合液各浸泡30min后用蒸馏水洗涤至中性， 装柱后，用PH4. 6的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液平衡，上述三氯乙酸溶液上样进行梯度洗脱并用记录仪绘出洗脱曲线，分段收集洗脱液，将有活力部分集中于透析袋中用甘油浓缩，再用双缩脉法测总蛋白含量，继续以下的柱层析；(2)凝胶过滤柱层析取适量的kphadeX-G25加蒸馏水浸泡4h，按常规方法用 NaOH-NaCl混合液浸泡0.证，抽滤除去碱液并用蒸馏水洗涤至中性，加热煮沸除去气泡。装柱，用PH7. 4的缓冲液平衡，将上述有活力洗脱液的浓缩液上样、洗脱并用记录仪绘出洗脱曲线，分段收集有活力洗脱液；回收溶剂，干燥后即可。或直接购买市售产品。3、重组水蛭素(专利号01105798. X)，其分子的第32至35位和第53至66位氨基酸序列为Arg32-Gly33-Asp;34-Ser35 ；Gln53-Gly54-Asp55-Phe56-Glu57-Pro58-Ile59 -Pro60-Glu61-Asp62-Ala63-Tyr64-Asp65-Glu66o4、决明子提取物的制备方法为取决明子药材，粉碎至粗粉，用60 85%乙醇回流提取2 3次，每次6 12倍量溶剂，提取时间为0. 5 2.证，合并提取液，干燥即可。5、茯苓提取物的制备方法为取茯苓药材，用药材6 12倍量的60 85%乙醇回流提取2 3次，每次0. 5 2.证，合并提取液，干燥即可。主药水蛭提取物、天然水蛭素与重组水蛭素能达到活血化瘀、畅通血脉的作用；配伍珍珠粉有清热泻火，养肝明目的作用，同时外用能在一定程度上达到物理遮盖黑眼圈、眼袋的作用；决明子主入肝经，能达到明目养目的作用；茯苓利水渗湿，能有效的对抗浮肿， 解决眼袋问题。水蛭、珍珠、决明子与茯苓的配伍使用，能达到畅通血脉、明目养目、利水消肿的作用，再配合健康的生活方式，对于改善或彻底祛除黑眼圈、眼袋具有良好的效果。利用水蛭用于改善或祛除黑眼圈和眼袋的新用途，采用水蛭为主要原料制成外用化妆品。可制成的化妆品有眼霜、眼部凝胶剂、眼膜、眼部按摩精油、眼部精华素等，可根据各自剂型的需要加入适当的辅料。本发明利用水蛭用于改善或祛除黑眼圈和眼袋，作用明显，为公众提供了一种全新的选择。

具体实施例方式利用水蛭可改善或祛除黑眼圈和眼袋的新用途，发明人针对其有效浓度及具体剂型做了相关研究。本发明使用的主要原料及附加活性成分制备方法如下1、水蛭提取物的常规制备方法为取新鲜水蛭全体绞碎制成水蛭浆，按体积配比 水蛭浆1份浓盐酸0. 01 0. 1份、丙酮1 10份的配料提取，取丙酮液，残渣再用丙酮浸提，过滤，合并丙酮提取液，干燥即可。2、天然水蛭素提取工艺为取新鲜水蛭唾液，加入丙酮，冷却，取上清液离心，残渣加三氯乙酸溶解，取样上柱层析(1)阴离子交换柱层析取适量DEAE-C52加蒸馏水使其膨胀，按常规方法依次用 NaOH-NaCl混合液、稀盐酸溶液及NaOH-NaCl混合液各浸泡30min后用蒸馏水洗涤至中性， 装柱后，用PH4. 6的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液平衡，上述三氯乙酸溶液上样进行梯度洗脱并用记录仪绘出洗脱曲线，分段收集洗脱液，将有活力部分集中于透析袋中用甘油浓缩，再用双缩脉法测总蛋白含量，继续以下的柱层析；(2)凝胶过滤柱层析取适量的kphadeX-G25加蒸馏水浸泡4h，按常规方法用 NaOH-NaCl混合液浸泡0.证，抽滤除去碱液并用蒸馏水洗涤至中性，加热煮沸除去气泡。装柱，用PH7. 4的缓冲液平衡，将上述有活力洗脱液的浓缩液上样、洗脱并用记录仪绘出洗脱曲线，分段收集有活力洗脱液；回收溶剂，干燥后即可。或直接购买市售产品。3、重组水蛭素(专利号01105798. X)，其分子的第32至35位和第53至66位氨基酸序列为Arg32-Gly33-Asp;34-Ser35 ；Gln53-Gly54-Asp55-Phe56-Glu57-Pro58-Ile59 -Pro60-Glu61-Asp62-Ala63-Tyr64-Asp65-Glu66o4、决明子提取物的常规制备方法为取决明子药材，粉碎至粗粉，用60 85% (ν/ ν)乙醇回流提取2 3次，每次6 12倍量溶剂，提取时间为0. 5 2. 5h，回收溶剂后，干燥即可。优选乙醇浓度70 80%，溶剂用量及提取时间以提取出较多干物质为佳。5、茯苓提取物的常规制备方法为取茯苓药材，用药材6 12倍量的60 85% (ν/ν)乙醇回流提取2 3次，每次0. 5 2. 5h，合并提取液，干燥即可。优选乙醇浓度70 80 %，溶剂用量及提取时间以提取出较多干物质为佳。以下实例中均采用优选条件制备的水蛭提取物、天然水蛭素、重组水蛭素、决明子提取物、茯苓提取物。一、本发明活性成分量效关系的确定实验1 将水蛭提取物、天然水蛭素和重组水蛭素不同浓度的水溶液单独使用在同一个测试者眼周皮肤上，每天早晚各使用一次，使用5周后，根据黑眼圈、眼袋祛除效果筛选产品中活性成分的有效浓度。测试结果见表1 (-)表示无明显效果

(+)表示有效果(++)表示有明显效果(+++)表示有非常明显效果表1说明，采用不同浓度的水蛭药物的效果差异为当浓度低于5%时，对眼周血流量几乎没有较大的改善，故祛黑眼圈和眼袋效果不明显；当浓度为5%以上时，血流量得到较大的改善，祛黑眼圈和眼袋效果明显；但当浓度增加到25%以上时，测试者反映会出现过分油腻的现象，使用时间较长后会产生脂肪粒。综上实验结果，最终选择5 25% (g/ g)的浓度。表1单独使用水蛭中活性成分对黑眼圈、眼袋的作用效果表

权利要求

1.水蛭用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的应用，其特征在于采用水蛭的提取物、或天 然水蛭素、或重组水蛭素。

2.根据权利要求1所述的水蛭用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的应用，其特征在于以 水蛭提取物、天然水蛭素与重组水蛭素为主要活性成分，与珍珠、决明子提取物、获等提取 物中的ー种或任意组合共同组成活性成分，其重量配比如下水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份珍珠0 5份决明子提取物0 5份获等提取物0 5份；其中，珍珠、决明子提取物、获等提取物中至少ー种不为O ；水蛭提取物的制备方法为取新鲜水蛭全体绞碎制成水蛭菜，按体积配比水蛭菜1 份浓盐酸0. 01 0. 1份、丙酮1 10份的配料提取，取丙酮液，残渔再用丙酮浸提，过滤， 合并丙酮提取液，干燥即可；决明子提取物的制备方法为取决明子药材，粉碎至粗粉，用60 85%乙醇回流提取 2 3次，锋次6 12倍量溶剂，提取时间为0. 5 2.证，合并提取液，干燥即可；获等提取物的制备方法为取获等药材，用药材6 12倍量的60 85%乙醇回流提 取2 3次，锋次0. 5 2.证，合并提取液，干燥即可。

3.根据权利要求2所述的水蛭用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的应用，其特征在于活 性成分重量配比如下水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份珍珠1 5份决明子提取物3 5份获等提取物3 5份。

4.根据权利要求2或3所述的水蛭用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的应用，其特征在于 将活性成分加入常规辅料制成外用化妆品；外用化妆品中主要活性成分占外用化妆品的重 量百分比为5-25%。

5.用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的组合物，其特征在于是以水蛭提取物、天然水蛭 素与重组水蛭素为主要活性成分，与珍珠、决明子提取物、获等提取物中的ー种或任意组合 作为活性成分制成，活性成分是由如下重量配比的原料药制成水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份珍珠0 5份决明子提取物0 5份获等提取物0 5份；其中，珍珠、决明子提取物、获等提取物中至少ー种不为O ；所述水蛭提取物的制备方法为取新鲜水蛭全体绞碎制成水蛭菜，按体积配比水蛭 菜1份浓盐酸0. Ol 0. 1份、丙酮1 10份的配料提取，取丙酮液，残渔再用丙酮浸提，过滤，合并丙酮提取液，干燥即可；所述决明子提取物的制备方法为取决明子药材，粉碎至粗粉，用60 85%乙醇回流提取2 3次，每次6 12倍量溶剂，提取时间为0. 5 2. 5h,合并提取液，干燥即可；所述茯苓提取物的制备方法为取茯苓药材，用药材6 12倍量的60 85%乙醇回流提取2 3次，每次0. 5 2.证，合并提取液，干燥即可。

6.根据权利要求5所述的用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的组合物，其特征在于活性成分由如下重量配比的原料药制成水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份珍珠1 5份决明子提取物3 5份茯苓提取物3 5份。

7.根据权利要求5或6所述的用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的组合物，其特征在于 加入常规辅料制成外用化妆品。

8.根据权利要求7所述的用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的组合物，其特征在于外用化妆品中水蛭提取物、或天然水蛭素、或重组水蛭素占外用化妆品的重量百分比为5-25%。

9.根据权利要求7所述的用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的组合物，其特征在于所述的外用化妆品为眼霜、眼部凝胶剂、眼膜、眼部按摩精油、眼部精华素。

10.用于改善或祛除黑眼圈或眼袋的组合物的制备方法，其特征在于以水蛭提取物、 天然水蛭素与重组水蛭素为主要活性成分，与珍珠、决明子提取物、茯苓提取物中的一种或任意组合作为活性成分制成，活性成分是由如下重量配比的原料药制成水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份珍珠0 5份决明子提取物0 5份茯苓提取物0 5份；其中，珍珠、决明子提取物、茯苓提取物中至少一种不为0 ；所述水蛭提取物的制备方法为取新鲜水蛭全体绞碎制成水蛭浆，按体积配比水蛭浆1份浓盐酸0. 01 0. 1份、丙酮1 10份的配料提取，取丙酮液，残渣再用丙酮浸提， 过滤，合并丙酮提取液，干燥即可；所述决明子提取物的制备方法为取决明子药材，粉碎至粗粉，用60 85%乙醇回流提取2 3次，每次6 12倍量溶剂，提取时间为0. 5 2. 5h,合并提取液，干燥即可；所述茯苓提取物的制备方法为取茯苓药材，用药材6 12倍量的60 85%乙醇回流提取2 3次，每次0. 5 2. 5h,合并提取液，干燥即可； 活性成分优选由如下重量配比的原料制成水蛭提取物、天然水蛭素或重组水蛭素5 25份珍珠1 5份决明子提取物3 5份茯苓提取物3 5份。

全文摘要

本发明属于化妆品领域，涉及水蛭的新应用，具体是以水蛭为主要原料，水蛭用于改善黑眼圈或眼袋的应用、组合物及其制备方法。为了更好的应用水蛭这一新用途，本发明提供了一种以水蛭为主要原料制备的用于改善或祛除黑眼圈和眼袋的组合物，该组合物主要活性成分为水蛭提取物、天然水蛭素与重组水蛭素中任意一种，可选择加入珍珠、决明子提取物、茯苓提取物中一种或几种组成复方，其重量配比为其中，珍珠、决明子提取物、茯苓提取物中至少一种不为0。本发明利用水蛭用于改善或祛除黑眼圈和眼袋，作用明显，为公众提供了一种全新的选择。

文档编号A61K8/98GK102188360SQ201110106898

公开日2011年9月21日 申请日期2011年4月27日 优先权日2011年4月27日

发明者张海燕, 曾新, 甘奇志 申请人:重庆时珍阁普生药业有限公司