影响细胞转染的因素有哪些？

转染过程中许多因素会影响转染效率：如细胞种类、细胞密度；质粒大小、质粒纯度；血清；抗生素；转染试剂等。

转染实验中，以下几个因素需多加注意。

1. 转染前的细胞状态和密度

转染时细胞密度以 70~90%（贴壁细胞）或 2×10⁶~4×10⁶细胞 / mL（悬浮细胞）为宜，细胞密度过高会严重影响细胞状态（周期进程阻滞，凋亡增加等）。转染效率随着细胞传代次数不同会发生很大变化，因为传代次数少的细胞转染率非常低，而对传代次数较多的细胞而言，其转染最佳剂量差别较大。同时支原体污染会严重降低细胞的转染效率，因此转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。

2. 转染时的质粒纯度

假使质粒不纯，如带少量盐离子，蛋白、代谢物污染等都会显著影响转染复合物的有效形成；而含有内毒素的质粒对细胞存在很大的毒性作用。抗生素一般对真核细胞无毒，但转染过程中细胞通透性增加，使抗生素进入细胞，从而降低细胞活性，导致转染效率低下。

3. 转染后的筛选时间

转染后筛选不能太早或太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷大，增殖较慢，太晚会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆。一般要在转染 48 h 之后开始加抗生素筛选。

转染流程示意图

4. DNA 与转染试剂的比例

许多转染方法需要优化 DNA 与转染试剂的比例。不同细胞系转染效率通常不同，细胞系的选择通常根据实验需要确定。在转染前应根据实验要求和细胞特性选择合适的转染试剂，不同转染试剂转染效率差别很大，好的转染试剂能让您事半功倍。