重组慢病毒包装技术构建原理

慢病毒包装系统

采用第3代重组慢病毒包装系统制备病毒颗粒。为了增加慢病毒的安全性能，病毒制备所必需的元件序列被拆分到4个质粒当中，分别是：

1)1个编码目的基因的慢病毒转移质粒。目的基因两侧各有一个LTR(Iong terminal repeat)序列，LTR序列促使目的基因整合到目的细胞基因组里。为了提高安全性能，转移质粒的3' LTR缺失了部分序列，使得整合后的病毒基因组失去自我复制能力。

2)2个包装质粒。其中一个质粒编码Rev，另外一个质粒编码Gag和Pol。

3)1个编码VSVG包膜蛋白的质粒。

利用上述质粒包装出来的重组慢病毒颗粒，被称为自我失活VSV-G假型慢病毒(self-inactivating VSV-Gpseudotyped Ientivirus)。

每次包装重组慢病毒，包装质粒和编码包膜蛋白的质粒都是固定不变的，变的是编码目的基因的转移质粒。

慢病毒生产

生产携带目的基因的重组慢病毒颗粒，过程如下图：

首先将转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒转染到293T细胞。更换新鲜的培养基后，继续培养48^ 72小时。收集培养液，进行离心浓缩后，就可得到转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的超纯病毒颗粒，以利用蔗糖超速离心进一步去除杂质，从而获得纯度更高的病毒颗粒。

质量控制

对每一批病毒都进行滴度检测，严格控制质量，让你百分百放心。针对用携带荧光报告基因的转移质粒生产的病毒，用荧光法检测病毒的转导率，如能达到使用要求，再进一步采用qPCR法检测病毒滴度。