具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物及其应用.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102114065 B (45)授权公告日 2012.07.11 CN 102114065 B *CN102114065B* (21)申请号 201110030871.4 (22)申请日 2011.01.28 A61K 36/37(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (73)专利权人 河南中医学院 地址 450008 河南省郑州市金水区金水路 1 号 (72)发明人 王君明 崔瑛 (74)专利代理机构 郑州天阳专利事务所 ( 普通 合伙 ) 41113 代理人 聂孟民 (54) 发明名称 具有防治癌症作用的。

2、金钱草与雷公藤中药组 合物及其应用 (57) 摘要 本发明涉及一种具有防治癌症作用的金钱 草与雷公藤中药组合物及其应用， 可有效解决 癌症的用药及治疗问题。以雷公藤、 金钱草作 原料药物， 经粉碎， 以重量百分比计的雷公藤粉 40 -80， 金钱草粉 20 -60混合在一起制 成， 或由雷公藤活性成分及金钱草活性成分以重 量百分比计的雷公藤活性成分 40 -80， 金钱 草活性成分 20 -60制成， 本发明组合物是一 种广谱性的治癌症药物， 可有效用于制备治疗胃 癌、 肝癌、 乳腺癌、 食管癌、 胰腺癌、 肺癌、 膀胱癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 大肠癌、 结肠癌、 皮肤癌、 甲状 腺癌、 宫。

3、颈癌、 白血病， 是治疗癌症药物上的创新。 (51)Int.Cl. 审查员 张忠会 权利要求书 2 页 说明书 9 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 2 页 说明书 9 页 1/2 页 2 1. 一种具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征在于， 以雷公藤、 金 钱草作原料药物， 经粉碎， 以重量百分比计的雷公藤粉 40 -80， 金钱草粉 20 -60混 合在一起制成， 或由雷公藤活性成分及金钱草活性成分以重量百分比计的雷公藤活性成分 40 -80， 金钱草活性成分 20 -60制成， 其中所述的雷公藤活性成分和金钱草活性成 分分别为雷公藤和。

4、金钱草粉碎后， 分别经溶剂提取 3 次， 每次加 10 倍量的溶剂， 提取 2 小 时， 分别得雷公藤、 金钱草活性成分， 所述的溶剂为水、 50 -95乙醇、 丙酮、 乙酸乙酯、 汽 油或石油醚的一种。 2. 根据权利要求 1 所述的具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征 在于， 由雷公藤活性成分和金钱草活性成分以重量百分比计的 ： 雷公藤活性成分 40， 金 钱草活性成分 60， 混合在一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公藤重量10倍量的质量浓度为75的乙醇提取2小时， 合并3次滤液后， 减压 浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ；。

5、 所述的金钱草活性成分是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每 次用 10 倍量的质量浓度为 75的乙醇提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含 生药浓度 1g/mL。 3. 根据权利要求 1 所述的具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征 在于， 由雷公藤活性成分和金钱草活性成分以重量百分比计的 ： 雷公藤活性成分 50， 金 钱草活性成分 50， 混合在一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公藤重量 10 倍量的乙酸乙酯提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于 含生药浓度 1g/mL ； 所述的金钱草活性成。

6、分是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每次用 10 倍量的 乙酸乙酯提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL。 4. 根据权利要求 1 所述的具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征 在于， 由雷公藤活性成分和金钱草活性成分以重量百分比计的 ： 雷公藤活性成分 80， 金 钱草活性成分 20， 混合在一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公藤重量 10 倍量的汽油或石油醚提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相 当于含生药浓度 1g/mL ； 所述的金钱草活性成分是将金钱草粉碎后， 提取 3 。

7、次， 每次用 10 倍 量的汽油或石油醚提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL。 5. 一种具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征在于， 该组合物是由 雷公藤、 金钱草分别粉碎后， 取雷公藤 250g， 金钱草 250g， 用质量浓度为 75的乙醇作溶剂 浸没， 浸渍 48 小时， 缓缓渗漉， 收集初漉液 425mL， 另器保存， 继续渗漉， 到渗漉液接近无色 为止， 收集续漉液， 在55浓缩至相对比重为1.2-1.4的稠膏状， 加入初漉液425mL混匀， 用 75乙醇稀释至 500mL， 静置 3 天， 过滤， 得流浸膏剂。 6. 一种具。

8、有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征在于， 该组合物是由 雷公藤、 金钱草各250g， 粉碎， 混合后， 用5000g乙酸乙酯回流提取3次， 每次2小时， 回收乙 酸乙酯得浸膏， 干燥， 粉碎， 过 100 目筛， 加入 12.5g 硬脂酸镁， 混匀装入硬胶囊。 7. 根据权利要求 1 所述的具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物， 其特征在 于， 所述的雷公藤、 金钱草组合物或雷公藤、 金钱草活性成分组合物与不同的添加剂混匀分 别制成浸膏、 流浸膏、 酒剂、 酊剂、 口服液、 丸剂、 散剂、 滴丸、 片剂或胶囊剂。 8. 权利要求 1 所述的具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤。

9、中药组合物在制备防治胃 癌、 肝癌、 乳腺癌、 食管癌、 胰腺癌、 肺癌、 膀胱癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 大肠癌、 结肠癌、 皮肤 权 利 要 求 书 CN 102114065 B 2 2/2 页 3 癌、 甲状腺癌、 宫颈癌、 白血病的药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102114065 B 3 1/9 页 4 具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物及其应用 技术领域 0001 本发明涉及医药， 特别是一种具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物及 其应用。 背景技术 0002 癌症是严重威胁人类健康和生命的主要疾病之一。 在癌症治疗中， 尽管传统的放、 化疗已经取得了很大的。

10、进展， 但由于其在杀伤癌细胞的同时， 也对人体产生不同程度的毒 副作用， 其中主要是骨髓抑制和免疫功能低下， 可造成白细胞减少症等， 有时甚至不得不中 断治疗， 从而也限制了药物的疗效。为了克服传统的放、 化疗所带来的一系列弊病， 近年来 药学工作者不断的探索， 应用植物药进行防治癌症成为了当前研究的热点领域。 0003 卫矛科植物雷公藤 (Tripterygium wilfordii Hook.f.， TWHF) 具有抗癌、 抗类 风湿性关节炎、 治疗多种肾病、 杀虫、 抗艾滋病毒等多种生物活性， 突出的药效使其是继丹 参、 银杏之后的又一个被国内外广泛、 深入研究的中药， 同时也是有毒中药。

11、。雷公藤甲素 (Triptolide， TP， 分子式 C20H24O6) 是从雷公藤中提取的一个具有松香烷结构的三环氧二萜 内酯类化合物， 是雷公藤药材及其制剂 ( 雷公藤片、 雷公藤多苷片等 ) 的主要有效成分。现 代研究表明， TP 不仅有抗类风湿性关节炎作用， 还有抗肝癌、 白血病、 乳腺癌、 胰腺癌、 胃癌 等多型癌症的作用 10-13。TP 在美国正在进行一期抗癌临床研究， 是目前热点研究的天 然活性产物。然而， TP 也是 TWHF 诱发肝毒性、 肾毒性等毒副作用的主要成分。由于雷公藤 药材及其活性提取物毒性强， 且安全窗口窄 ( 毒性剂量仅为活性剂量的 4 倍左右 )， 临床用。

12、 药安全隐患大， 严重限制了其临床应用。 0004 配伍是中医用药的特色之一， 通过恰当配伍可以起到减毒增效的作用。金钱草为 报春花科植物过路黄 Lysimachia christinae Hance 的干燥全草， 主要含酚性成分、 黄酮 类、 苷类、 多糖等成分 18-21， 具有利湿退黄， 利尿通淋， 解毒消肿， 用于包括黄疸型肝炎在 内的多种肝胆疾病的治疗 22。虽然金钱草具有良好的保肝活性， 但其与雷公藤配伍应用 能否降低雷公藤诱导的肝毒性以及能否增强雷公藤的抗癌活性均未见公开报道。 发明内容 0005 针对上述情况， 为克服现有技术之缺陷， 本发明之目的就是提供由雷公藤和金钱 草提取。

13、物组成的一种具有防治癌症作用的金钱草与雷公藤中药组合物及其应用， 可有效解 决癌症的用药及治疗问题。 0006 本发明解决的技术方案是， 以雷公藤、 金钱草作原料药物， 经粉碎， 以重量百分 比计的雷公藤粉 40 -80， 金钱草粉 20 -60混合在一起制成， 或由雷公藤活性成 分 ( 提取物 ) 及金钱草活性成分 ( 提取物 ) 以重量百分比计的雷公藤活性成分 ( 提取 物 )40 -80， 金钱草活性成分 ( 提取物 )20 -60制成， 其中所述的雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 和金钱草活性成分 ( 提取物 ) 分别为雷公藤和金钱草粉碎后， 分别经溶剂提取 3 次， 每次加 10 倍量。

14、的溶剂， 提取 2 小时， 分别得雷公藤、 金钱草活性成分 ( 提取物 )， 所述的 说 明 书 CN 102114065 B 4 2/9 页 5 溶剂为水、 50 -95乙醇、 丙酮、 乙酸乙酯、 汽油或石油醚的一种。 0007 本发明组合物是一种广谱性的治癌症药物， 可有效用于制备治疗胃癌、 肝癌、 乳腺 癌、 食管癌、 胰腺癌、 肺癌、 膀胱癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 大肠癌、 结肠癌、 皮肤癌、 甲状腺癌、 宫 颈癌、 白血病， 是治疗癌症药物上的创新。 具体实施方式 0008 以下结合实施例对本发明的具体实施情况做详细说明。 0009 实施例 1 ： 0010 本发明在实施中是由雷公。

15、藤提取物和金钱草提取物以重量百分比计的 ： 雷公藤提 取物 40， 金钱草提取物 60， 混合在一起制成， 其中所述的雷公藤提取物是雷公藤粉碎 后， 提取3次， 每次用雷公藤重量10倍量的质量浓度为75的乙醇提取2小时， 合并3次滤 液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 所述的金钱草提取物是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每次用 10 倍量的质量浓度为 75的乙醇提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相 当于含生药浓度 1g/mL ； 0011 实施例 2 ： 0012 本发明在实施中是由雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 和金钱草活性成分 ( 提取物 ) 以 重量百分。

16、比计的 ： 雷公藤活性成分(提取物)50， 金钱草活性成分(提取物)50， 混合在 一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公 藤重量10倍量的乙酸乙酯提取2小时， 合并3次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度1g/ mL ； 所述的金钱草活性成分 ( 提取物 ) 是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每次用 10 倍量的乙酸 乙酯提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 0013 实施例 3 ： 0014 本发明在实施中是由雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 和金钱草活性成分 ( 提取物 ) 以 重量。

17、百分比计的 ： 雷公藤活性成分(提取物)60， 金钱草活性成分(提取物)40， 混合在 一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公 藤重量 10 倍量的水提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 所 述的金钱草活性成分 ( 提取物 ) 是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每次用 10 倍量的水提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 0015 实施例 4 ： 0016 本发明在实施中是由雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 和金钱草活性成分 ( 提取物 ) 以 。

18、重量百分比计的 ： 雷公藤活性成分(提取物)70， 金钱草活性成分(提取物)30， 混合在 一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公 藤重量 10 倍量的丙酮提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 所述的金钱草活性成分 ( 提取物 ) 是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每次用 10 倍量的丙酮提 取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 0017 实施例 5 ： 0018 本发明在实施中是由雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 和金钱草活性成分 ( 提取物 。

19、) 以 重量百分比计的 ： 雷公藤活性成分(提取物)80， 金钱草活性成分(提取物)20， 混合在 一起制成， 其中所述的雷公藤活性成分 ( 提取物 ) 是雷公藤粉碎后， 提取 3 次， 每次用雷公 说 明 书 CN 102114065 B 5 3/9 页 6 藤重量 10 倍量的汽油或石油醚提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓 度 1g/mL ； 所述的金钱草活性成分 ( 提取物 ) 是将金钱草粉碎后， 提取 3 次， 每次用 10 倍量 的汽油或石油醚提取 2 小时， 合并 3 次滤液后， 减压浓缩至相当于含生药浓度 1g/mL ； 0019 实施例 6 ： 0。

20、020 雷公藤、 金钱草分别粉碎后， 取雷公藤 250g， 金钱草 250g， 用质量浓度为 75的 乙醇作溶剂浸没， 浸渍 48 小时， 缓缓渗漉， 收集初漉液 425mL， 另器保存， 继续渗漉， 到渗漉 液接近无色为止， 收集续漉液， 在 55浓缩至相对比重为 1.2-1.4 的稠膏状， 加入初漉液 425mL 混匀， 用 75乙醇稀释至 500mL， 静置 3 天， 过滤， 即得流浸膏剂 ； 0021 实施例 7 ： 0022 取雷公藤、 金钱草各 250g， 粉碎， 混合后， 用 5000g 乙酸乙酯回流提取 3 次， 每次 2 小时， 回收乙酸乙酯得浸膏， 干燥， 粉碎， 过 10。

21、0 目筛， 加入 12.5g 硬脂酸镁， 混匀装入硬胶 囊。 0023 本发明在实际生产中， 可按雷公藤粉、 金钱草粉或雷公藤、 金钱草活性成分 ( 提取 物 )， 以重量百分比 40 -80 20 -60混合在一起后， 添加不同的添加剂制成浸膏、 流浸膏、 酒剂、 酊剂、 口服液、 丸剂、 散剂、 滴丸、 片剂或胶囊剂， 有效用于治疗各种癌症， 如 胃癌、 肝癌、 乳腺癌、 食管癌、 胰腺癌、 肺癌、 膀胱癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 大肠癌、 结肠癌、 皮肤 癌、 甲状腺癌、 宫颈癌、 白血病。 0024 本发明药物经科学组合和制备， 组分问互相支持， 具有活血化瘀、 消炎解毒、 扶正 祛邪。

22、， 提高抗肿瘤活性之功效， 并经实验得到了充分的证明， 有关实验资料如下 ： 0025 一、 雷公藤醇提物、 金钱草醇提物、 雷公藤金钱草醇提物组合物对小鼠肉瘤 S180 实体瘤的影响 0026 1.1 实验材料 0027 1.1.1 受试动物 0028 ICR 小鼠， ， 体重 18 22g， 由河南医学动物实验中心提供 豫医动管 ( 证 ) 字 第 0038 号 。 0029 1.1.2 受试药物及其制备 0030 雷公藤醇提物 (LE) ： 采用雷公藤根饮片粗粉， 用 10 倍量 75乙醇提取三次， 每次 2h， 滤液合并后减压浓缩至无醇味， 以雷公藤生药计浓度 1g/mL， 即得雷公藤。

23、醇提物 LE。 0031 金钱草醇提物 (JE) ： 采用金钱草全草饮片粗粉， 用 10 倍量 75乙醇提取三次， 每 次 2h， 滤液合并后减压浓缩至无醇味， 以金钱草生药计浓度 1g/mL， 即得金钱草醇提物 JE。 0032 雷公藤金钱草醇提物组合物 ： 采用雷公藤根饮片粗粉和金钱草全草饮片粗粉按 1/3 4/3 的比例 ( 重量比 ) 组合后， 用 10 倍量 75乙醇提取三次， 每次 2h， 滤液合并后减 压浓缩至无醇味， 以雷公藤生药计浓度 1g/mL， 即得雷公藤金钱草醇提物组合物 LJ。 0033 1.2 实验方法 0034 采用荷瘤小鼠体内实验， 从肉瘤 S180 荷瘤小鼠腹。

24、内抽取对应肿瘤细胞， 用台盼蓝 染色， 计数， 用无菌生理盐水稀释至 (1.0-1.3)107cells/mL 于离心管中， 插冰上， 皮下注 射 (sc) 接种该浓度肿瘤细胞于 ICR 小鼠右腋下， 注射量 0.1mL/ 只。按体重随机分组， 分 别为 Control(CMC-Na)、 5-Fu、 金钱草醇提物 JE、 雷公藤醇提物 LE、 LE+JE 组。将各提取物 或单体化合物用 0.5 CMC-Na 溶解至所需浓度， 于接种后 24h 开始按体重灌胃 (ig) 给药， 说 明 书 CN 102114065 B 6 4/9 页 7 CMC-Na 组 ig 给予同等体积的 0.5 CMC-。

25、Na， 5-Fu( 用 dd 水溶解至 2.5mg/mL) 组腹腔注射 (ip)， 每隔一天注射一次 ； 连续给药 10d， 末次给药后 24h， 摘眼球采血， 供离心分离血清后 测定血清ALT和AST活力用 ； 取瘤组织， 称重。 按下公式计算肿瘤抑制率(Tumor inhibition ratio)。Tumor inhibition ratio( ) (C-T)/C100， 其中 C 指 CMC-Na 对照组平均 瘤重， T 指给药组平均瘤重。以瘤重有显著性差异， 且肿瘤抑制率 30为药物具有抗肿瘤 活性的标准。 0035 1.3 实验结果 0036 1.3.1LE、 JE 及其组合物 L。

26、J 对小鼠肉瘤 S180 实体瘤的影响 0037 与模型组比较， 如表 1 所示， 接种肉瘤 S180 的小鼠在连续给予受试药物 12d 后， JE(200mg/kg) 瘤重与模型组比无显著差异 (P 0.05)， 而 LE(200mg/kg) 瘤重较模型组 显著减小 (P 0.05)， 表明 JE(200mg/kg) 对 S180 实体瘤无效， 而 LE(200mg/kg) 有效 ； 与 LE(200mg/kg) 比较， 配伍金钱草后的组合物 LJ(200mg/kg) 较 LE(200mg/kg) 瘤重显著减小 (P 0.05)， 肿瘤抑制率明显提高， 表明金钱草醇提物可增强雷公藤醇提物的抗。

27、肿瘤活性。 0038 表 1LE、 JE 及其组合物 LJ 对小鼠肉瘤 S180 实体瘤的影响 (n 10) 0039 0040 与模型组比较， *P 0.05， *P 0.01 ； 与 LE 比较， #P 0.01 0041 1.3.2 对血清生化指标的影响 0042 由表 2 可知， 阳性药 5-Fu(25mg/kg) 和单用 LE(200mg/kg) 均可使 S180 荷瘤小鼠 血清肝损伤指标 ALT 和 AST 均极显著升高 (P 0.01)， 表明 5-Fu 和 LE 均诱导了荷瘤小鼠 的肝毒性， 而本发明中药组合物在保持疗效的同时， 对肝损伤指标无明显影响 (P 0.05)， 说明。

28、本发明中药组合物具有避免化疗药 5-Fu 或单用雷公藤诱导肝损伤副作用的优势。 0043 表 2 组合物 LJ 对小鼠肉瘤 S180 血清生化指标的影响 (n 10 ；) 0044 说 明 书 CN 102114065 B 7 5/9 页 8 0045 与模型组比较， *P 0.05， *P 0.01 0046 二、 组合物全粉混悬液、 水提液、 75乙醇提取液、 乙酸乙酯提取液、 丙酮提取液、 120# 汽油提取物、 人工胃液提取物体内抗肿瘤作用研究 0047 在确定了雷公藤金钱草乙醇提取物组合物具有较强的抗 S180 实体瘤作用之后， 本发明进一步考察了本发明中药组合物的混悬液及其多种提取。

29、液的体内抗肿瘤作用。 0048 2.1 实验材料 0049 2.1.1 受试动物 ( 同实施例 1 之 1.1.1) 0050 2.1.2 受试药物及其制备 0051 组合物全粉混悬液 ： 雷公藤36g， 金钱草36g， 粉碎， 过150目筛， 混悬于180mL蒸馏 水。 0052 组合物水提液 ： 雷公藤 36g， 金钱草 36g， 加 10 倍量水， 回流提取 3 次， 每次 2h， 过 滤合并滤液， 回收水使成浓度 0.4g/mL。 0053 组合物 75乙醇提取液 ： 雷公藤 36g， 金钱草 36g， 加 10 倍量 75乙醇， 回流提取 3 次， 每次 2h， 过滤合并滤液， 回收。

30、乙醇使成浓度 0.4g/mL。 0054 组合物乙酸乙酯提取液 ： 雷公藤 36g， 金钱草 36g， 加 10 倍量乙酸乙酯， 回流提取 3 次， 每次 2h， 过滤合并滤液， 回收乙酸乙酯使成浓度 0.4g/mL。 0055 组合物丙酮提取液 ： 雷公藤 36g， 金钱草 36g， 加 10 倍量乙酸乙酯， 回流提取 3 次， 每次 2h， 过滤合并滤液， 回收丙酮使成浓度 0.4g/mL。 0056 组合物 120# 汽油提取液 ： 雷公藤 36g， 金钱草 36g， 加 10 倍量 75乙醇， 回流提取 3 次， 每次 2h， 过滤合并滤液， 回收 120# 汽油使成浓度 0.4g/m。

31、L。 0057 组合物人工胃肠液提取物 ： 雷公藤 36g， 金钱草 36g， 加 10 倍量人工胃液， 在摇床 (模拟胃肠蠕动)摇动4h， 将滤液和药渣放入10倍量的人工肠液， 在摇床上摇动4h， 收集肠 液， 回收使之浓度 0.4g/mL。 0058 2.2 实验方法 ( 同实施例 1 之 1.2) 0059 2.3 实验结果 0060 如表 3 所示， 与模型组比较， 各给药组瘤重均显著降低， 表明雷公藤金钱草组合物 全粉混悬液及各提取物均有抗肿瘤作用， 其中以 75乙醇提取液和乙酸乙酯提取液的作用 最强 ； 且该组合物 75乙醇及乙酸乙酯提取液抗肿瘤作用均明显强于阳性药 5-Fu 的，。

32、 而组 合物丙酮提取液、 全粉混悬液、 水提液、 丙酮及汽油提取液抗肿瘤作用与 5-Fu 相当。 0061 表 3 组合物混悬液及多种提取液对肉瘤 S180 实体瘤的影响 (n 10) 0062 说 明 书 CN 102114065 B 8 6/9 页 9 0063 与模型组比较， *P 0.05， *P 0.01 0064 三、 中药组合物及其活性成分体外抗癌活性研究 0065 通过整体动物实验发现本发明中药组合物具有抗肿瘤作用， 发明人从雷公藤的 75乙醇提取物中分离得到二萜内酯类成分雷公藤甲素 (Shamon LA， Pezzuto JM， Graves JM， MehtaRR， Wan。

33、gcharoentrakul S， Sangsuwan R， Chaichana S， Tuchinda P， Cleason P， ReutrakulV.Evaluation of the mutagenic， cytotoxic， and antitumor potential of triptolide， a highly oxygenated diterpene isolated from Tripterygium wilfordiiJ.Cancer Lett， 1997， 112(1) ： 113-117.)( 纯度在 98以上 ) ； 采用 50乙醇 回流提取， 石油醚脱脂， NK。

34、A-9 型大孔吸附树脂柱层析从金钱草中分离纯化得到金钱草总黄 酮(纯度75.8) ； 采用常规水提醇沉并结合Sevage除蛋白的方法从金钱草中提取纯化得 到金钱草总多糖 ( 纯度 62.4 )。发明人进一步通过体外实验考察了该发明中药组合物及 其活性成分的抗癌活性。 下面将以金钱草总黄酮(JF)、 金钱草总多糖(JP)对雷公藤中抗癌 活性较强的雷公藤甲素的增效作用为例进行介绍。 0066 3.1 实验材料 0067 3.1.1 细胞株来源 0068 人肝癌 Hep3B、 胃癌 SGC-7901、 胰腺癌 BXPC-3、 乳腺癌 MCF-7、 肺癌 A549、 膀胱癌 T24 人卵巢癌 HO89。

35、10、 结肠癌 LS174、 大肠癌 CCL229、 前列腺癌 PC-3、 食管癌 Eca-109、 皮肤 癌 A431、 甲状腺癌 SW-579、 白血病 K562、 宫颈癌 Hela 细胞株均购自中国科学院上海细胞生 物学研究所。 0069 3.1.2 主要试剂 0070 IV 型胶原酶 (Sigma 公司 )， DEME 培养基 (GIBCO 公司 )， 胎牛血清 ( 杭州四季青生 物公司 )， 二甲基亚砜 (DMSO)(GIBCO 公司 )， MTT(Sigma 公司 )， 蛋白酶抑制剂 (Amresco)， 5-Fu( 上海邦成 )， 其它试剂为国产分析纯等。 0071 3.1.3 。

36、主要仪器设备 0072 层流超净台 ； 二氧化碳培养箱， 购自 Thermo 公司 ； 倒置相差显微镜， 购自 Olympus 公司 ； 酶标仪， 购自 Biotek 公司。 说 明 书 CN 102114065 B 9 7/9 页 10 0073 3.2 实验方法 0074 细胞增殖实验(MTT) ： 用0.25胰酶消化细胞， 1000rpm离心， 用含5活性炭灭活 血清， 无酚红的 DMEM 高糖培养液 37， 95 CO2培养 48h( 以排除内源激素的干扰 )， 即细 胞进入对数生长期， 用 0.25胰酶消化细胞， 以 2103个 / 孔接种细胞于 96 孔培养板上， 每孔体积 180。

37、L， 24h 细胞贴壁， 每列设 5 个复孔， 分别设溶剂对照、 5-Fu 阳性对照、 实验药 物组， 加药后继续观察培养 48h。 0075 呈色与比色 ： 在加药培养 48h 后， 取出培养板， 每孔加入 MTT 溶液 (5mg/mL)20L， 37， 5 CO2继续培养 4h 终止培养。小心吸弃孔内培养上清液， 每孔加入 150L DMSO 振 荡 10min， 使结晶物充分溶解， 选择 490nm 在自动酶标仪 (BIO-TEK) 上测定各孔吸收值 (OD， 与活细胞数量成正比 )， 计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率 ( 对照孔 OD 值 - 实验孔 OD 值 )/ 对照孔 OD 值。

38、 100。 0076 3.3 实验结果 0077 由表 4-8 可知， 本发明中药组合物 75乙醇提取液及其二萜内酯类活性成分 TP 均可显著抑制人肝癌细胞Hep3B、 胃癌细胞SGC-7901、 膀胱癌细胞T24、 卵巢癌细胞HO8910、 胰腺癌细胞 BXPC-3、 乳腺癌细胞 MCF-7、 肺癌细胞 A549、 结肠癌细胞 LS174、 大肠癌细胞 CCL229、 前列腺癌细胞PC-3、 食管癌细胞Eca-109、 皮肤癌细胞A431、 甲状腺癌细胞SW-579、 白血病细胞 K562、 宫颈癌细胞 Hela 的生长， 提示该中药组合物及其二萜类成分雷公藤甲素 可用于治疗肝癌、 胃癌、 。

39、乳腺癌、 肺癌、 膀胱癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 食管癌、 胰腺癌、 大肠癌、 结肠癌、 皮肤癌、 甲状腺癌、 宫颈癌、 白血病等多型癌症的治疗。同时， 本发明也考察了组合 物的抗癌效果， 结果发现金钱草黄酮 (JF) 和金钱草多糖 (JP)， 分别在与雷公藤甲素 (TP 配 伍时均可显著增强雷公藤甲素对以上多种癌细胞的抗癌作用， 且配伍后的抗癌活性强于化 疗药 5-Fu 的， 提示金钱草所含的黄酮和多糖均可与雷公藤中所含的二萜类成分配伍高效 应用于治疗以上癌症疾病， 且可作为替代化疗药 5-Fu 应用的选择。 0078 表 4 组合物及其活性成分对人癌 BXPC-3、 MCF-7、 A549。

40、 细胞生长抑制率 ( ) 的影 响 0079 0080 与溶剂对照组比较， *P 0.01 ； 与 5-Fu 比较， #P 0.05 0081 表 5 组合物及其活性成分对人癌 SGC-7901、 Hep3B、 T24 细胞生长抑制率 ( ) 的 说 明 书 CN 102114065 B 10 8/9 页 11 影响 0082 0083 与溶剂对照组比较， *P 0.01 ； 与 5-Fu 比较， #P 0.05 0084 表 6 组合物及其活性成分对人癌 HO8910、 LS174、 PC-3 细胞生长抑制率 ( ) 的影 响 0085 0086 与溶剂对照组比较， *P 0.01 ； 与 。

41、5-Fu 比较， #P 0.05 0087 表 7 组合物及其活性成分对人癌 CCL229、 Eca-109、 A431 细胞生长抑制率 ( ) 的 影响 0088 说 明 书 CN 102114065 B 11 9/9 页 12 0089 与溶剂对照组比较， *P 0.01 ； 与 5-Fu 比较， #P 0.05 0090 表 8 组合物及其活性成分对人癌 SW-579、 K562、 Hela 细胞生长抑制率 ( ) 的影 响 0091 0092 与溶剂对照组比较， *P 0.01 ； 与 5-Fu 比较， #P 0.05 0093 由上述实验资料表明， 本发明公开了一种具有防治癌症作用的。

42、组合物， 主要由下 列质量百分比的原料药制备而成 ： 雷公藤 40 80， 金钱草 20 60。本发明的中药 组合物具有防治癌症作用， 可克服化疗药或单用雷公藤用药时易诱发肝损伤的局限， 而且 显著增强单用雷公藤时的抗癌活性， 适用于胃癌、 肝癌、 乳腺癌、 食管癌、 胰腺癌、 肺癌、 膀胱 癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 大肠癌、 结肠癌、 皮肤癌、 甲状腺癌、 宫颈癌、 白血病等多型癌症的治 疗， 可用于制备高效低毒抗癌药物， 实现雷公藤、 金钱草组合物作为制备治疗癌症药物的应 用， 开拓了雷公藤和金钱草高效低毒配伍应用的药物价值， 为中医药学的发展作出创造性 贡献。 说 明 书 CN 102114065 B 12 。