补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响
谭张奎1， 周广文1， 张妍1， 朱伟1， 吴小雪2， 熊梦欣1， 黄诗怡1， 向楠3*
（1.湖北中医药大学 中医临床学院，武汉 430065；2.湖北省妇幼保健院，武汉 430065；3.湖北中医药大学 第一临床学院，武汉 430065）
［摘要］ 目的：研究补肾化痰方在防治绝经后骨质疏松症中对免疫T细胞亚群辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的影响。方法：6月龄SD雌性大鼠60只，按随机数字表分为假手术组，模型组，戊酸雌二醇组（0.184 mg·kg-1），补肾化痰方低、中、高剂量组（4.7，9.4，18.8 g·kg-1），除假手术组外，其他组均采用手术切除卵巢，制作绝经后骨质疏松症模型。术后1周灌胃给药，模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃，1次/d，灌胃12周后取材。运用微计算机断层扫描技术（Micro CT）检测大鼠骨量及骨微结构；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中叉头框蛋白p3（Foxp3），维甲酸相关核孤受体γt（RORγt）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测骨组织中Foxp3，RORγt mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测骨组织中Foxp3，RORγt蛋白表达量；运用流式细胞抗原检测，分析并比较各组Th17，Treg细胞的数量。结果：与假手术组比较，模型组大鼠骨量降低、骨小梁显著减少（P<0.01）；骨微结构破坏，血清中Foxp3浓度显著降低，RORγt浓度显著升高（P<0.01），骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达降低，RORγt mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01），骨组织中Treg细胞数量减少（P<0.01），Th17细胞数量增加，且Th17/Treg值显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组骨量明显增加（P<0.05，P<0.01），血清中Foxp3浓度升高，RORγt浓度显著降低（P<0.01），骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），但低剂量组mRNA差异无统计学意义，RORγt mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），骨组织中Treg细胞数明显升高，Th17细胞数量明显降低（P<0.05，P<0.01），且Th17/Treg显著降低（P<0.01）。结论：补肾化痰方可以提高去卵巢大鼠骨量，改善骨微结构，并使骨组织中Treg细胞数量增加而Th17细胞数量减少。进而推论补肾化痰方可能通过调节Th17/Treg平衡，而发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。
［关键词］ 绝经后骨质疏松症；补肾化痰方；骨免疫；辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）； 微计算机断层扫描技术
审核：窝头
编辑：阿冰