DHFR系统工作原理
图1显示了 DHFR 酶如何催化叶酸转化为四氢叶酸。这种前体是细胞复制的，嘌呤和嘧啶从头合成所必需的。
当 CHO 细胞中的蛋白质表达系统有 DHFR 缺失时，研究人员用重组 DNA转染CHO 细胞，该 DNA 由与 DHFR 基因紧密相连的目的基因组成。甲氨蝶呤 (MTX) 选择系统用于选择产生目标蛋白质的 CHO 细胞。MTX 是一种类似于叶酸的药物，它与 DHFR 结合，从而抑制四氢叶酸的产生，而四氢叶酸是嘌呤和嘧啶从头合成所必需的。
在基因扩增过程中，CHO 细胞在越来越高水平的 MTX 中培养。将选择具有增加的 DHFR 基因拷贝并结合感兴趣的基因的 CHO 细胞。
DHFR 水平不足的 CHO 细胞被剥夺了核苷前体（次黄嘌呤和胸苷）并死亡。一旦被选中，来自 CHO DHFR 阴性宿主的转染细胞系不需要培养基中的 MTX。
图1 DHFR 酶催化叶酸转化为四氢叶酸
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