细胞周期实验流程(以碘化丙啶PI为例)
细胞周期实验流程
细胞固定:300g离心5min后,弃上清收集细胞沉淀。用预冷的PBS洗涤2次后弃上清,逐滴加入-20℃预冷的70%乙醇,一边加一边摇匀。最后置于4℃下固定至少30min(固定时间建议做预实验进行优化)。
细胞染色:300g离心5min后弃上清,用2ml的PBS洗涤2次(注意避免Dnase污染),加入适量的PI染料(1mg/ml)和Rnase(2mg/ml),室温避光孵育15min。
上机前过滤:PI具有很强的粘附性,容易形成细胞聚团,建议可以使用200目的筛网过滤样本后上机
上机检测:低速上样,建议有效的单个细胞采集10000个以上。
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