细胞周期实验流程(以碘化丙啶PI为例)

细胞周期实验流程

细胞固定:300g离心5min后,弃上清收集细胞沉淀。用预冷的PBS洗涤2次后弃上清,逐滴加入-20℃预冷的70%乙醇,一边加一边摇匀。最后置于4℃下固定至少30min(固定时间建议做预实验进行优化)。

细胞染色:300g离心5min后弃上清,用2ml的PBS洗涤2次(注意避免Dnase污染),加入适量的PI染料(1mg/ml)和Rnase(2mg/ml),室温避光孵育15min。

上机前过滤:PI具有很强的粘附性,容易形成细胞聚团,建议可以使用200目的筛网过滤样本后上机

上机检测:低速上样,建议有效的单个细胞采集10000个以上。

(0)

相关推荐

  • Genie带你认识细胞周期

    细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,在这一过程中细胞的遗传物质复制病均等地分配到两个子细胞中.细胞周期一般分为5个阶段:G0(静止期).G1期(D ...

  • 细胞周期检测实验流程

    细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段.在这一过程中,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞.生命即是通过细胞遗传物质从 ...

  • 流式细胞术检测细胞周期和凋亡实验流程

    流式细胞术检测细胞周期: 细胞周期:指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期.S期.G2期和M期组成.G0/G1期:有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,进入下一个细胞周 ...

  • 细胞增殖与活性检测实验流程

    细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖,通过分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去,是生物体生长.发育.繁殖和遗传的基础.单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体.多 ...

  • 细胞凋亡检测实验流程

    细胞凋亡(Apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡.作为细胞的一种基本生物学现象,细胞凋亡是机体为更好地适应生存环境,而主动争取的一种死亡过程,它涉及一系列基因的激活 ...

  • 细胞迁移与侵袭检测实验流程

    肿瘤细胞迁移(migration)与侵袭(invasion)检测均为能够间接反映肿瘤迁移或侵袭能力,或特定情况下的迁移或侵袭能力的实验.通过研究肿瘤细胞的迁移与侵袭能力,能够为探究肿瘤发生及转移的机制 ...

  • 细胞自噬检测实验流程

    自噬(Autophagy),或称自体吞噬,是一个涉及到细胞自身结构通过溶酶体机制而被分解的过程,该过程是一个受到紧密调控的步骤,帮助细胞产物在合成.降解以及接下来的循环中保持一个平衡状态." ...

  • 细胞划痕实验流程

    细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移能力的体外试验方法.其原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,即为"划痕& ...

  • 细胞培养实验流程及注意事项

    一.无菌 无菌的操作要**细胞培养中的头等大事,从培养基到操作过程再到培养箱,不管哪一环节忽视了无菌的原则,细胞的损失必将惨重,甚至有可能全军覆没. 1.超净台 超净台可以看做是一个微型的无菌室,做好 ...

  • 基因敲除技术实验流程

    根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ ...