金黄色葡萄球菌（G+细菌）遗传改造

原理：zisha质粒经酶切后与目的基因融合片段连接，连接产物转化大肠杆菌中间宿主菌，获得携带外源片段的zisha载体。

载体电转化工程金黄色葡萄球菌，使zisha载体得到特异的甲基化修饰，提高后继电转化靶细菌的成功率。甲基化修饰载体电转化到靶细菌。由于zisha载体不能在非工程化的金黄色葡萄球菌中复制，在抗生素选择压力下，只有细菌基因组靶位点整合有zisha载体的插入突变株才可以存活。在第二轮反向选择压力下，只有细菌基因组发生第二次同源重组并丢失zisha质粒的细菌才可以存活，在第二组同源重组后，子代细菌产生靶基因的缺失突变株和野生型菌株，通过PCR对平板上的克隆筛选，再经过测序验证，即可获得目的基因缺失突变（或其它遗传改造）。