放射免疫(RIA)技术介绍
放射免疫(RIA)是以放射性核素作示踪剂的标记**分析方法,它具有的高度灵敏性、特异性和性等特点,特别适用于**、多肽等含量微少物质的超微量分析。如:肿瘤类;心血管,肾病,***类;多肽因子类;脑-肠肽类;胃肠病,骨代谢类;甲状腺功能类;糖尿病类;性腺类等。
放射**(RIA)样品收集方法:
1. 取静脉血2ml,注入含10%EDTA二钠30μl和抑肽酶40μl(此抗凝剂我公司有售,70元/套)的试管中,混匀,4℃ 3000rpm离心10min,分离血浆(溶血样品影响到测定结果)。如需要可分装2-3份保存,放-20℃,样品可保存2个月,在-70℃以下可存放半年。测定前,使样本置于室温或冷水中复融,再次4℃,3000rpm离心5min,取上清测定。
2.组织样品的处理:取出活组织,吸去血迹,称重,尽快加入生理盐水1ml研磨,制成匀浆。4℃3000rpm离心15min,取上清-20℃以下保存,测定前好预实验确定样品稀释度。
另外,每种组织的样品非特异结合(U0)可能有差异,每份标本好单独做一个U0或每组做一个U0。取组织的重量一般在100mg左右为好。
3.尿样品留取:取12小时晨尿(晚7:00-早7:00)事先在容器里放入2ml冰乙酸,量总尿量,取3ml尿煮沸5-10min后-20℃保存。测定前混匀离心4℃3000rpm 5min取上清,调pH值至7.0左右。结果出来后:浓度pg/ml×总尿量÷12小时=浓度pg/小时。
注意事项:测定兔血清时,应改用25%PGE500μl做分离剂(离心前,NSB、S0、S1-S5管补加γ球蛋白100μl,样品管补加PBS各100μl,然后再加25%PEG500μl)。测兔血浆时好每个标本做一个U0。25%PEG和r球蛋白我公司提供。
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