动物疼痛模型的建立方法及注意事项（3）：福尔马林试验

一提起福尔马林( formalin)，很多人都会想起开始学人体解剖学时那种刺鼻辣眼的气味，可以想象注射福尔马林造成的不适，这种刺激与前面提到的热灼刺激不同，它是一种化学刺激，并且持续时间也较长，是一种慢性持续性疼痛模型的代表。Dubuisson和Dennis (1977)把福尔马林试验的行为反应分为4级：O级：注射福尔马林的脚爪仍可压在地板上并承受其体重；1级：动物把较轻的身体部分放在注射的脚爪上，并轻轻地压在地板上；2级：动物把注射的脚爪抬离地面；3级：动物舔，咬或者摇晃注射过福尔马林的脚爪。

福尔马林注射可以引起两期的疼痛感觉，这两个期的区分除了时间上（第一期为注射后立即的疼痛持续到lOmin左右，第二期的疼痛则从注射后大约15 - 20min开始，持续60min以上），药理学上也有明显的不同，即非类固醇抗炎药(nonstexoidal anti-inflammatory agents，NSAIDs)对第一期疼痛无效但可减弱第二期的疼痛，因而也说明福尔马林性第二期疼痛是一种周围炎症性疼痛。这种疼痛一般认为与中枢敏化作用有关，研究这类疼痛对于临床上组织损伤造成的痛觉过敏机制探讨极力重要。

（一）实验材料

1、实验动物健康成年雄性小鼠(25 - 30g)或大鼠(250g)，分组饲养。

2、实验药物生理盐水（对照）和实验药物。

3、5%福尔马林（可用Signa的IO%福尔马林缓冲溶液，按I:l稀释，这里lO%的溶液里含4%

的甲醛，因此，5%福尔马林溶液就是2%的甲醛溶液）。

4、带28.5G针头的0.5ml（大鼠用）或30C针头的50FLI（小鼠用）微量(Hamilton)注射器；带

27G（大鼠）或26C（小鼠）针头的1．Oml注射器。

5、清洁的单个动物分装盒（如带盖的鞋盒）。

6、手持计数器（一只动物一个），钟表或计时器。

7、镜子若干。

8、电子控制的定时亮光装置。

（二）实验步骤

1、从动物房取出实验动物，称重后，用不退色标记笔标记要注射福尔马林或生理盐水的后爪，注意标记脚爪的前后面，将对照组与实验组分开。

2、将动物放人试验时用的清洁的容器盒（鞋盒）内，把镜子放到容器盒的后面及侧面，确保实验者能从不同的角度看到标记的脚爪。让动物适应15 - 30mi。。

3、福尔马林准备大鼠实验用28.5G针头的0.5ml注射器抽取5%福尔马林50vl;小鼠实验用

30G针头的50FLl微量注射器抽取5%福尔马林20l。

4、药物注射用27G（大鼠）或26C（小鼠）的1．Oml注射器注射对照溶液或实验药物，注射后给出至少lOmin时间，让药物在体内作用后才可进行下一步疼痛测试。不同的药物可能需要不同的作用时间，也可在注射福尔马林后注射，这主要用于研究第二期疼痛反应。

5、福尔马林注射将动物从容器盒中取出放到桌上，用一只手轻轻抓住动物的身体躯干，另一手抓住尾巴，让动物“坐”在桌上便于拉伸其后爪。把尾巴放到抓身体的手中，空出手来把标记的脚爪拉出来，然后拿取装有福尔马林的微注射器。大鼠注射可以将溶液注射到脚拇指背上踝下方的皮下即可；而小鼠注射则要将福尔马林溶液注射到脚底爪的中央皮T。

6、注射福尔马林后，立即将动物放回到容器内并开始计时，这是疼痛的第一期反应时间。其余的动物也依次类似进行注射，然后开始分别计时。

7、一般在福尔马林注射后最初的反应在大小鼠是不一样的，即大鼠出现的是爪趾的抽缩( flich-ing)，而小鼠则主要是舔注射的部位，因此，必须观察第一只注射大鼠后爪在15。内抽缩的次数，然后依次记录其他3只大鼠的抽缩次数；完成第4只后又从第1只大鼠开始，这样循环计算共10min。小鼠的观察是每隔5min观察Imin，然后隔Imin注射下一只小鼠，因而可以注射4只小鼠，这样每间隔5min观察1只小鼠，共计40min，小鼠的观察主要计算其舔脚爪的时间。

8、记录疼痛第一期内大鼠总的后抓抽缩次数或小鼠的舔脚趾的总时间。为了有效利用时间，可以在第一期于第二期之间准备下一组动物的称重，标记及适应等。

9、大鼠福尔马林注射后30min即可开始计算第二期的抽缩次数，一般计算20min；小鼠注射后1O- 40min可以算第二期开始，也同第一期一样计算其舔爪趾的总时间。

10、重复上述步骤，在所有实验动物完成测试后（一般每组至少8个数据），分组将其结果平均并作统计学处理。

（三）注意事项

1、为了减少抓取动物的压抑( stress)行为，可以在实验前一到两天开始训练抓取动物，这样在注射福尔马林时就可避免压抑造成的实验结果的波动。

2、试验动物太小(如< 200g)、福尔马林注射不当或检测方法不对都可造成实验结果的偏差，因此，应选大动物、标准注射程序和有效的检验方法。

3、福尔马林疼痛的第二期可能变异较大，预实验阶段可以计算第二期的整个阶段(从注射后第20 - 60min)，这样知道在大概时间段内反应的高峰期后即可有选择地对其他动物进行重点时间段计算。

4、福尔马林的浓度一般定为5%，但是有些药物（知吗啡2mg/kg）可能因这种浓度的刺激太强而没有作用，但是这个药物的剂量足以完全消除1%福尔马林的反应，因而为了测试不同药物对疼痛反应的影响，必须用不同浓度的福尔马林注射到脚爪上。