磁珠新用｜免疫磁珠在粮油检验新标准—黄曲霉毒素测定中的应用

粮油检测

黄曲霉毒素测定前处理方法

黄曲霉毒素前处理方法如上图所示，但目前的前处理方法普遍存在操作步骤繁琐，样品损失严重，耗时长，且需要消耗大量的有机溶剂，回收率不高等问题。

在上一版的标准中采用免疫亲和柱净化法，基于免疫亲和的原理来实现净化除杂，虽然能够实现较好的净化效果，但是该方法的成本较高，难以被实验室普及使用。因此亟需建立一种快速、准确、方便的黄曲霉毒素前处理净化方法，有利于监控食品、调味品、饲料和茶叶中黄曲霉毒素的含量，从而保障食品安全。

标准颁布

为了满足当前国内粮油检测、监测定量分析的要求，2020年7月，国家粮食和物资储备局发布的《LS/T 6138-2020 粮油检验粮食中黄曲霉毒素的测定免疫磁珠净化超高效液相色谱法》标准开始正式实施。该标准拟利用免疫磁珠的净化，基于液相色谱检测，建立一种高通量、快速、重复性好、易于自动化的黄曲霉毒素精准定量分析方法。

标准编制说明中指出：使用免疫磁珠法进行样本处理既能保留免疫亲和柱良好的净化效果和稳定性，又能够降低操作难度，减少操作时间和劳动强度，易于自动化处理。

标准看点之磁珠新用

1.检测项目、原理及检出限

标准适用于小麦、玉米、稻谷和植物油等粮油样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的测定。各类物质检出限如下表。

标准中规定了免疫磁珠净化超高效液相色谱测定粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、测定、结果计算和精密度等内容。

黄曲霉毒素检出限一览表

检测原理

2.新旧标准样品前处理方法对比

免疫亲和柱净化法样本处理流程图

免疫磁珠净化法样本处理流程图

从两张流程图对比可发现：采用免疫亲和柱净化法对于样本处理需要精提后进行净化，操作步骤繁琐，样品损失严重，耗时长，且需要消耗大量的有机溶剂，污染大；而采用免疫磁珠净化法样本处理只需粗提，且步骤简单易操作，耗时也较短；这一新标准的颁布，无疑是对食品安全检验更有效率的保障。

3.标准中对免疫磁珠的性能要求

免疫磁珠与样品稀释液的反应时间是磁珠净化的关键，将免疫磁珠与浓度为5μg/kg黄曲霉毒素B1标准溶液反应，分别考察不同反应时间（1、3、5、10、15分钟）结合效率，可以看出，反应5分钟后磁珠吸附毒素信号基本不变，说明5分钟的反应时间可以满足免疫磁珠反应的要求。

不同反应时间下免疫磁珠富集的AFB1含量

拓展看点

免疫磁珠法：操作简单+高通量自动化

免疫磁珠结构示意图

磁珠提取法通过调节缓冲液pH值，利用静电吸附作用与磁珠实现有效结合，之后在外加电场的条件下，去除废液并加以洗涤，最终实现样本提取处理目的。

磁珠的方法避免了抽真空和高速离心等步骤，可以减少外力对样品的损伤。该方法操作便捷，试剂简单，而且适用于在96孔板或384孔板中的高通量自动化操作。

随着技术的进步，越来越多的厂家开发了不同的基于免疫磁珠提取试剂盒。磁珠表面多种多样的化学修饰为实现复杂的实验带来了可能。

磁珠提取法（图片来自网络）

关于黄曲霉毒素

黄曲霉毒素（Aflatoxins，AF）是一种化学结构类似的二氢呋喃香豆素的衍生化合物。在自然界中存在广泛，种类较多，主要常见的包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2. 该物质对人畜有强烈的致病性、致癌性，严重危害人体健康，其中黄曲霉毒素B1被世界卫生组织（WTO）的癌症研究机构（IARC）划定为I类致癌物，其毒性是氰化钾的10倍。

黄曲霉毒素B1

国内外非常重视黄曲霉毒素的防控，为控制黄曲霉毒素污染的危害，国家法典委员会（CAC）和美国食品与药品监督管理局（FDA）规定食品中黄曲霉总量不能超过15μg/kg。

GB 2761-2017 《食品中真菌毒素限量》国家食品安全标准中规定的各类物质限量标准