shRNA干扰模型细胞稳转株构建技术原理
细胞稳转株是一种经过特定基因修饰的细胞株,可根据实验所需表达外源基因、进行基因敲除、敲入、以及精确改变基因序列(如点突变)。对比一般瞬转方法,利用细胞稳转株开展实验能够获得长期而稳定的特定性状,因此有助于增强实验的可重复性。细胞稳转株除了可用于基因调控研究,也非常适合于长周期的药物筛选和药理学研究、重组蛋白和抗体生产等实验。
shRNA稳转株一般使用慢病毒或逆转录病毒在靶细胞基因组中导入shRNA表达框,实现shRNA在细胞系中的长期稳定表达。不同于siRNA瞬转,shRNA稳转株可内源性地稳定表达siRNA效果,不受转染效率影响,从而获得更稳定的基因敲低效果。
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