转基因小鼠构建技术实验流程

 PiggyBAC系统利用PB转座子特有的“剪切粘贴”机制,使DNA片段在载体和基因组之间“自由”转移,从而有效介导外源DNA片段与基因组的整合。目的基因片段克隆至PiggyBAC转座子质粒中,质粒与PiggyBAC转座酶mRNA一起注射至小鼠受精卵中,通过转座酶的作用,目的片段被整合到基因组上的TTAA位点处,从而构建过表达外源基因的转基因小鼠。

  转座子介导转基因技术优势

  采用优化后的高活性PiggyBAC转座酶,能实现更高的转座效率。

  可插入更大的目的片段。

  转座子介导转基因实验流程

(0)

相关推荐

  • Nat Biotech|CRISPR转座酶系统实现DNA整合

    原核和真核生物基因组中大片段DNA的定向整合拥有广阔的应用前景.理想的定向整合系统不应被DNA片段大小限制,可一步到位实现高特异性的定向整合,整合位点可控,且整合过程不依赖于DNA双链断裂(DSBs) ...

  • 实验发现 新冠病毒可把自身片段逆转录进我们的基因

    majer @ 2021.05.13 , 12:51 人类的基因组是一个大坟场,里面到处都是曾经困扰我们祖先的病毒的基因片段.如果麻省理工学院研究人员的最新研究经受住了质疑,那么新冠病毒很可能也会加入 ...

  • 不想再用慢病毒了,我还有什么别的选择吗?piggyBac transposon

    慢病毒可快速.高效的将目的基因整合到宿主细胞基因组,非常适合用于构建稳转细胞株.但慢病毒也有缺点,即使是稳转细胞株,可能会随着传代次数的增加而慢慢丢失干扰或者过表达的效率.其中可能是原因是在多克隆稳转 ...

  • 基因敲除技术实验流程

    根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ ...

  • 基因敲入技术实验流程

    根据基因敲入位点序列设计合成sgRNA,将Cas9.sgRNA及Donor质粒共同转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对基因敲入位点进行切割,引起DNA双链断裂(Double-strand ...

  • RNAi干扰技术实验流程

    RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的.由双链RNA诱发的.同源mRNA高效特异性降解的过程.RNAi大体分为两步,首先起始RNA(dsRNA或miRNA ...

  • 原代细胞永生化技术实验流程

    体外培养细胞在发育.组织维持与重塑.肿瘤发生机制.再生医学.新药开发等生命科学各研究领域中发挥了重要作用.原代细胞经过有限代数的增殖后通常会出现衰老死亡,因此生物学家需要不断地用组织重新进行原代培养以 ...

  • 激活筛选技术实验流程

    通过在细胞中过表达特定基因的cDNA是基因功能研究的重要方法,但是由于cDNA文库难以覆盖大量大片段的基因,基因大小也会影响转染效率,cDNA文库不能覆盖各种转录本等种种因素限制了全基因组范围的过表达 ...

  • 敲除筛选技术实验流程

    CRISPR/Cas9系统可以通过sgRNA高效.特异地靶向特定DNA序列,造成双链断裂,引入Indel(short insert/deletion)突变,从而导致目的基因的功能缺失.由于sgRNA序 ...

  • 基因条件性点突变小鼠技术实验流程

    条件性点突变主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxP.Flp-FRT.Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-loxP系统.在待突变目的基因序列两端各插入两种loxP位点,得到F ...

  • 条件性基因敲除小鼠技术实验流程

    条件性基因敲除主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxP.Flp-FRT.Dre-Rox等,其中最常用的是Cre-loxP系统.在待敲除目的基因序列两端各插入一个loxP序列,得到Fl ...

  • 全身性基因敲除小鼠技术实验流程

    根据目的基因序列设计合成sgRNA,与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵.Cas9核酸酶.sgRNA共同结合到基因组靶序列后,切割双链DNA,通过非同源末端连接(Non-homologous en ...