三角瓶试管母种纯化技术

液体菌种生产第一个重要环节就是选用母种上，母种的优劣直接影响液体菌种生产的成败。首先在菌种来源上一定要选择正规单位生产的母种试管，如果是自己提取的菌种必需要做完出菇试验，遗传稳定性试验之后才可以应用于液体菌种生产中使用。这只是第一步！

一，无论是从哪个单位引进/购买的母种在有条件的基础上最好都做一次彻底的脱毒处理，具体脱毒方法请看食用菌菌种脱毒技术汇总，然后再应用于液体菌种摇瓶母种生产。

如果没有食用菌菌种脱毒的条件也要做一次提纯复状处理。当然有很多朋友纠结试管母种转一次是否就不是所谓的一代母种或 N代母种的问题，就这个问题我们做一下正面的回答：理论上讲，试管转接一次或N次不影响母种的质量。而在实际生产中我们建议个人转管不要超过三次。因为在转管过程中如果操作不当容易造成由于杂菌或病毒侵入而导致菌种退化或变异的可能。当然也不排除采用更换培养基/加富培养基的手段之后再进行转管而使原始菌种活力增加，抗逆性增强的可能性。

摇瓶母种纯化复状的方法:一般厂家或单位生产用来销售的常规试管母种培养基多数采用的都是普通PDA培养基，主要原因有两点：一菌种不易老化，耐储运；二，菌种相对不易感染。所以大家在引进母种之后只要用加富培养基进行纯化复状一次即可。

附：加富培养基配方：洗净，削皮的马铃薯250克，放入1500毫升饮用水中煮至熟而不烂时用四层纱布过滤取汁1000毫升，然后加入葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，维生素B1 一片，充分溶解以后再加入琼脂20克继续煮至琼脂完全溶化以后开始分装试管，装入量为试管长度的五分之一，然后塞好棉塞或胶塞放入高压锅内灭菌后摆放斜面备用，具体流程请看母种培养基生产流程(图解）

三，转接试管就是将菌种进行一次转管，操作过程就是要严格按照菌种生产无菌操作的标准流程操作即可。根据需要每支试管可能 转接十几支至几十支，l转接时先将空白培养基试管中的培养基三分之一位置用接种钩划断，与试管内剩余的培养基分成两断，勾开一厘米的距离，取母种试管中3-5毫米见方的一块带有菌丝的培养基接入待接管试管斜面的前端，最后放到适温下培养，一般情况放到25-28度进行恒温培养，培养的过程中注意观察是否有杂菌感染，细菌污染，如果有需要及时挑出。如果有长势弱的试管也需要及时淘汰。

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有了优质的摇瓶母种就可以进行三角摇瓶的生产了。下期为大家讲述【液体菌种摇瓶生产技术要点】

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