外泌体制备技术

外泌体制备技术指南：

一、贴壁/悬浮细胞（收集细胞上清，除去细胞或细胞碎片）

（1）贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液;

（2）加入适量的PBS缓冲液冲洗-次,彻底去除FBS;

（3）按每10cm皿(约107细胞) 10m|培养基,换外泌体专用无血清培养基培养至少48hr (细胞融合率

至少70%以上) ;

（4）48hr后，收集细胞上清，并于3000x g离心15min,去除细胞或细胞碎片;

（5）放入-80°C冰箱中保存。

二、提前做好血清或者血浆的分离

（1）全血:通过采血管采集后，经过抗凝处理的全部血液。

（2）血浆:经过抗凝处理的全血，进行低速离心后的上清液，为淡黄色液体。

（3）血清:不经过抗凝处理的血液，让它自行凝固，在进行低速离心后的上清液，为淡黄色液体。

不同样本提取的外泌体比照图：

胞外囊泡/细胞微粒/微囊泡/外泌体/EVs/exosomes

含RNA和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)

绵羊网织红细胞-外泌体

直径40-100nm的盘状囊泡

exosome/外泌体

细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体

多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中

细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体

细胞类型均可分泌外泌体

特异性分泌的膜泡

外泌体含胆固醇和鞘磷脂

肥大细胞分泌外泌体

mRNA，exosomes具有生物活性

41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA

Rabs蛋白/鸟苷酸三磷酸酶(GTPases）

调节外泌体膜与受体细胞的融合

外泌体中含RAB4, RAB5和 RAB11，RAB7 和 RAB9

膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11

四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9)

热休克蛋白家族（(HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90

细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）

MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)

CD86(抗原提呈细胞来源)

乳凝集素（不成熟的树突状细胞）

外泌体中的蛋白含代谢类的酶

GAPDH

烯醇化酶 1

醛缩酶 1

PKM2

PGK1

PDIA3

GSTP1

DPP4

AHCY

TPL1

抗氧化蛋白

P4HB

LDH

亲环素 A

FASN,

MDH1

CNP

核糖体蛋白（RPS3）

信号转导因子

黑色素瘤分化相关因子

ARF1

CDC42

人类红细胞膜整合蛋白

SLC9A3R1

粘附因子

MFGE8

整合素

细胞骨架蛋白

泛素

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体

应用：机体免疫应答

抗原提呈

细胞迁移

细胞分化

肿瘤侵袭

细胞膜外泌体

外泌体产生于细胞中的多泡体

外泌体研究整体方案设计；

外泌体提取/粒径测量/电镜检测；

外泌体蛋白组/转录组

客户提供样本提取外泌体

外泌体抽离/抽提

全自动外泌体荧光检测分析系统

外泌体分离产品和工具

外泌体分离/提取

外泌体整体技术服务

外泌体lncRNA芯片

外泌体small RNA

外泌体提取

外泌体染色：PKH67/PKH26

外泌体WB鉴定

CD81外泌体慢病毒包装

CD63外泌体慢病毒包装

CD9外泌体慢病毒包装

外泌体粒径检测

外泌体电镜检测/透射电镜

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