科研｜法国巴黎神经科学研究所Jean-René Martin: 肠内需要的小核仁RNA jouvence延长了果蝇的寿命
编译：Nicole，编辑：十九、江舜尧。
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长寿受到遗传和环境因素影响，但其潜在机制仍尚未得到明确的解析。这篇论文在功能上表征了果蝇小核仁RNA（snoRNA）jouvence，其功能丧失会减少寿命。表达jouvence基因组区域可以挽救突变体的寿命，而过表达则可以延长寿命。肠上皮细胞需要jouvence，在突变体中肠道上皮表现出增生，而过表达jouvence防止增生。在分子上，发现突变体在18S和28S-rRNA上缺乏伪尿嘧啶化，而该功能可通过肠道中靶向表达jouvence恢复。从肠道进行的转录组分析显示，一些基因被上调或下调，同时恢复两个基因（ninaD或CG6296）的mRNA水平可以延长寿命。由于snoRNA在整个进化过程中在结构和功能上都非常保守，在包括人类在内的哺乳动物中鉴定出jouvence直系同源物，这表明其在长寿中的功能可能是保守的。10
论文ID
原名:Jouvence a small nucleolar RNA required in the gut extends lifespan in Drosophila
译名:肠内需要的小核仁RNA jouvence延长了果蝇的寿命
期刊: Nature Communications
IF:11.878（1区）
发表时间:2020.2.20
通讯作者: Jean-René Martin
通讯作者单位: 法国巴黎神经科学研究所
DOI号: 10.1038/s41467-020-14784-1
实验设计
首先对snoRNA: Ψ28S-1153及其相关基因进行了序列分析，鉴定其snoRNA特性。对其进行基因编辑，删除snoRNA: Ψ28S-1153后对果蝇日常饲养，检测寿命变化。对其进行了回补并将转基因品系与对照野生型杂交6次，然后与缺失snoRNA:Ψ28S-1153果蝇进行杂交，分别产生Del + rescue-1，-2，-3品系。分别比较这些品系雄性和雌性果蝇的寿命。
为了确定snoRNA表达位置，利用应该标记探针对多个遗传品系整个果蝇进行ISH标记。由于肠道上皮由四种细胞类型组成，分别使用特定细胞的启动子表达带有GFP的snoRNA，已确定snoRNA的具体定位。
利用p [UAST-snoRNA-Ψ28S-1153]（名为pUAS-jou8M）转入Myo1A-Gal4品系创制转基因品系将snoRNA靶向缺失背景中的肠上皮细胞，进一步利用RU486调控系统对组织特异性的基因表达进行调控，排除Myo1A-Gal4和Mex-Gal4在发育过程中对snoRNA的影响。利用ISH和定量PRC鉴定其表达，并比较其寿命变化。利用Northern blot检测不同品系及遗传操作下，不同位置的jouvence差异。
通过比较年轻（7天龄）和老龄（40天龄）的不同遗传操作下果蝇中肠细胞的数量，并利用不同的标记方法量化了肠干细胞（ISC）的数量和增殖以及ISC子细胞（成胚细胞:EBs）的错误分化，包括Delta-Gal4驱动pUAS-GFP-nls计算ISCs、抗PH3阳性细胞评估ISC的增殖、EdU标签（BrdU的最新更新替代品）标记分裂和核内复制细胞。为了评估jouvence是否影响核内复制，量化细胞核中DAPI染色荧光量，并RT-qPCR定量检测已知参与核内复制周期的主要基因之一Cyclin-E。
对野生型、jouvence缺失及诱导表达果蝇进行了RNA-seq转录组测序，比价表达差异大于2倍的基因，对其进行KEGG及KO分析，并通过RT-qPCR验证其表达模式。为了明确调控基因对寿命的作用，对其基因表达水平进行恢复，检测对寿命的影响，从而进一步确定jouvence的调控作用。为了阐明jou在应激反应中的作用，测试了转基因品系对干燥和饥饿的抵抗力。
利用BLAST和三级结构基序搜索（Infernal软件）进行的生物信息学，在果蝇、小鼠及人类中鉴定jou的同源物，并使用RT-PCR评估了人类和小鼠各种组织中的表达。
结果
snoRNA jouvence的遗传和分子表征
衰老涉及组织和感觉、运动功能的逐步下降和改变。在一项研究表征运动活动的基因中，重点研究了在中央复合体（CC）中表达的基因，对位于大脑中部的运动前中心进行了磷元素插入诱变，确定了增强子-陷阱轴P [GAL4] 4C，并表明靶向环状神经元的阻滞破坏了步行时间间隔的幂律分布。本文中进一步在分子上表征了P[Gal4]4C系，并在衰老的背景下，特别是在衰老对感觉运动功能的影响方面进行了研究。P[GAL4]4C插入第二个染色体上的两个假定基因CG13333和CG13334之间的位置50B1（图1a）。CG13333在胚胎中表达，而CG13334与乳酸脱氢酶基因部分同源。此外，一项生物信息学研究注释了CG13333和CG13334之间在P[GAL4]4C插入附近的snoRNA（snoRNA:Ψ28S-1153）（图1a），而最近的转录组分析已注释了另外两个假定的snoRNA（snoRNA:2R:9445205和snoRNA:2R:9445410）定位在第一个snoRNA:Ψ28S-1153的上游。但是，根据snoRNA的规范定义，其中H/ACA框形成发夹-铰链-发夹-尾部结构（图1d），而C/D框预测形成单个发夹结构，而这两个snoRNA不满足以上条件，表明它们可能不是真的或者至少不是规范的snoRNA。snoRNA:Ψ28S-1153形成典型的H/ACA双发夹（图1e）。为了在这个复杂的基因座中产生突变，使用切除基因的标准遗传方法删除了P[GAL4]4C，导致了632 bp缺失（F4）（简称:Del）（图1a），完全删除了snoRNA:Ψ28S-1153。利用RT-PCR测试缺失是否对两个编码相邻基因的表达有影响。结果表明与野生型（WT）的Canton-S（CS）蝇相比，这两个基因表达未发生变化。
涵盖snoRNA的基因组缺失会缩短寿命
有趣的是，对雌性进行的寿命测试（图1b）显示，与对照相比突变体蝇的寿命较短。为了测试snoRNA在长寿效应中的作用，创制3个转基因品系包含1723 bp的DNA片段，其中包含snoRNA的假定基因组和调控区（result-1、2和3）（图1a红色条），并测试其寿命。结果显示Del+rescue-1雌性的寿命恢复，而save-1系本身的寿命延长（图1b）。在另外两个独立的插入类型（result-2、result-3）也观察到了相似的结果（图1c）。最后，为了检查包含snoRNA:Ψ28S-1153的基因组区域的缺失是否存在两性异形，发现缺失后雄蝇的寿命更长。介于性别之间的寿命差异，本文首先研究雌性。
图1 P[Gal4]4C基因座的分子图和snoRNA:Ψ28S-1153的特征。A P[Gal4]4C基因座的基因组图。snoRNA:Ψ28S-1153（jouvence）以及其他两个假定的上游snoRNA（sno-2= snoRNA:2R:9445205和sno-3 = snoRNA:2R:9445410）及处于两个编码的相反方向基因:CG13333和CG13334。632 bp（红色虚线）的缺失（F4）包括3个推定的snoRNA。用于生成转基因果蝇的1723 bp基因组DNA片段（被基因组拯救的名称:rescue-1，rescue-2和rescue-3）（红线）。148 bp的snoRNA-jou片段（蓝色条）用于生成UAS-jou8M和pJFRC-MUH-jou1M构建体，与sno-2对应的166 bp片段（橙色条）和对应于sno-3的157 bp片段（粉红色条）。B对照组（CS）、Del（缺失F4）、Del +rescue1和rescue1的减少累积量。c与（b）相似，雌性Del（缺失F4）、Del + rescue-2、Del + rescue-3的累积量减少。d H/ACA snoRNAs结构的示意图。e snoRNA的示意图:15328S-1153（jouvence），具有典型的H / ACA盒结构。
snoRNA:Ψ28S-1153在肠道上皮细胞中表达
由于生物信息学研究仅snoRNA:Ψ28S-1153被鉴定为真正的snoRNA34，因此假设该snoRNA可能是该基因座中唯一具有功能性的snoRNA。为了确定snoRNA:Ψ28S-1153在哪些组织中表达，使用荧光标记的探针对整个果蝇进行了ISH（图2）。发现它在肠上皮核仁和前列腺中表达（图2a、c），在缺失系中不存在其表达（图2b、d）。此外DAPI复染表明它位于核仁中（图2c和d）。全身检查也显示snoRNA:Ψ28S-1153在对照组中也存在于卵巢营养细胞细胞核仁中（图2e、f、l和m），但在包括神经系统的其他任何组织中均未表达（见图2i、j、k）。类似地，当rescue与缺失系组合时，snoRNA:Ψ28S-1153的表达被限制在肠道上皮细胞中，但卵巢中没有（图2e、f）。对野生型果蝇的肠进行了ISH证实，snoRNA:Ψ28S-1153在中肠（图2g）中表达，但在后肠（图2h）中没有表达。这些结果表明，snoRNA:Ψ28S-1153寿命的影响可能是由于其在肠道上皮细胞而不是卵巢中的表达所致。肠道上皮由四种细胞类型组成：肠上皮细胞（ECs）、成肠细胞（EBs）、肠内分泌细胞（EEs）和肠干细胞（ISCs）。进一步验证发现其中只有EC特异性表达，表明其定位仅限于肠上皮细胞。
图2 snoRNA:Ψ28S-1153（jou）在肠道上皮中表达。snoRNA-jou的原位杂交（ISH）在整个果蝇中显示在野生型对照中（a）在肠道上皮中有限制性表达（红色圆点:白色箭头），而在缺失突变体中（b）不存在（白色箭头）。c jou在核仁中表达（DAPI染色），但在突变体中（d）没有。e，在转基因全蝇（rescue-1和Del + rescue-1）上的jou的FISH。在result-1（野生型背景）（e）中，在肠上皮（红色点:白色箭头）和卵巢（ov）中看到jou表达，而在Del + rescue-1中表达仅限于肠道上皮细胞，在卵巢中不存在（ov）（f）。g，h ISH，用FITC标记的酪酰胺（绿色）显示，在野生型CS蝇的中肠（g）中，上皮细胞中可检测到jou。h在后肠中，jou不表达。i–k整个野生型CS蝇进行ISH。i jou与酪胺-Cy3同表达（白色箭头）。j DAPI染色标记核。k（i）的叠加图。J 仅显示jou在肠道上皮中的表达（白色箭头），而在神经系统中没有表达。
成年期的snoRNA:Ψ28S-1153延长了寿命
创制p[UAST-snoRNA-Ψ28S-1153]（pUAS-jou8M）转基因品系。然后，将snoRNA表达专门靶向缺失背景中的肠上皮细胞，并通过ISH证实snoRNA确实在肠上皮细胞中正确表达。显示snoRNA-Ψ28S-1153在肠细胞中的特异性表达足以增加果蝇的寿命（图3a）。此外，要研究位于snoRNA:Ψ28S-1153上游的其他两个假定的snoRNA（snoRNA:2R:9445205和snoRNA:2R:9445410，分别简称为sno-2和sno-3）是否也参与了寿命确定，显示sno-2和sno-3在EC中的靶向表达并没有增加其寿命（图3b、c）。为了进一步支持该论证，还观察到与同基因对照果蝇相比长寿缺陷的挽救，用第2个Gal4驱动程序系Mex-Gal447表达snoRNA-Ψ28S-1153（UAS-jou8M）在肠的上皮中表达（图3d）。在缺失背景下，Mex-Gal4在肠道上皮细胞中的靶向表达也可以延长寿命。
其次，在缺失的遗传背景下，在孵化后立即开始饲喂RU486的果蝇，与没有饲喂RU486相比，成年期间的果蝇寿命增加（图3e）。相比之下，针对UAS-sno-2或UAS-sno-3的类似RU486诱导实验导致寿命减少（图3f、g），表明靶向表达这两个snoRNA可能是有害的，因此证实了jouvence是导致寿命延长的snoRNA。
图3 jou在肠细胞中的靶向表达足以挽救寿命。a snoRNA:Ψ28S-1153的靶向表达与对照组相比，在肠细胞中的靶向表达的寿命测试结果（生存曲线-累计下降）。肠上皮细胞中Del, Myo1A-Gal4> UAS-jou8M的表达足以延长寿命。b，c其他两种snoRNA的表达:sno-2（b）或sno-3（c）不会导致寿命的增加，甚至有害。d第二个肠道驱动细胞系Mex-Gal4（Del，Mex-Gal4> UAS-jou8M）也靶向肠上皮细胞的表达，足以延长寿命。e Mex-GS苍蝇（Del，Mex-GS> UAS-jou8M）仅在成年后喂入RU486触发snoRNA-jou的表达，与非喂养（non-诱导）同胞苍蝇相比寿命延长。 f，g仅在成年期饲喂RU486的Mex-GS苍蝇会触发sno-2（f）或sno-3（g）的表达，与未喂食（未诱导）的同胞相比，不增加而是减少寿命苍蝇。
为了确认snoRNA:Ψ28S-1153的表达水平并将其与寿命联系起来，研究者对切开的肠道进行了定量PCR，结果与预测一致。使用相同的驱动程序系将snoRNA:Ψ28S-1153过表达至内源性表达的13倍（Myo1A-Gal4）和28倍（Mex-Gal4）（图4f）。与它们的同基因对照果蝇相比，两种表达snoRNA显示出更长的寿命（图4a，b）。此外，与未诱导的果蝇（图4c）以及另一个独立的转基因品系相比，Mex-GS品系中通过RU486饲养的成虫特异性表达也增加了寿命（表达增加了30倍:图4g）。最后，与它们各自的同基因对照果蝇相比，Mex-GS对sno-2或sno-3诱导的成年期过表达没有改变寿命（图4d，e），这证实了snoRNA-jou对于确定寿命至关重要。总之， snoRNA:Ψ28S-1153在肠道上皮细胞中过表达时会延长寿命，可以将其视为长寿基因，因此将其命名为“jouvence”（jou）（意思是“青年”）。
图4肠细胞中jou的过表达增加了寿命。与野生型遗传背景相比，在野生型遗传背景下肠细胞中jou的靶向表达与寿命测试的结果（生存曲线-累计下降）。Myo1A-Gal4> UAS-jou8M（a）和Mex-Gal4> UAS-jou8M（b）在肠细胞中的过表达足以延长寿命。c仅在成年期过表达jou足以延长寿命（Mex-GS> UASjou8M只在成年期用RU486喂食的果蝇）。d，e仅在成年期过表达sno-2（d）或sno-3（e）对寿命没有任何影响（Mex-GS> UAS-sno-2或sno-3仅在成年期饲喂RU486 ）。f，g snoRNA jouvence的表达水平，以rp49为内参。
过表达jouvence可以防止肠道增生
在老龄蝇中肠道上皮退化会导致肠道增生，因此比价了年轻（7天龄）和老龄（40天龄）果蝇中肠细胞的数量。与各自的WT相比，在jou缺失的果蝇中肠细胞增加了（图5a），表明其增生。有趣的是，在携带被基因组拯救的转基因蝇（Del; rescue-1）的老龄蝇（40天龄）以及携带肠道靶向表达的老龄蝇中未观察到肠细胞数量的增加。图5a显示尽管程度较小但过表达jouvence防止增生（Mex-Gal4> jou1M和Myo1A-Gal4> jou1M）。使用不同的方法标记了肠干细胞（ISC）以及ISC子细胞（成胚细胞:EBs）的数量和增殖，图5b显示，在缺失jouvence的果蝇中，标记的细胞数量增加了。为了评估ISC的增殖，计算了抗PH3阳性细胞的数量，显示与图5b非常相似的模式（图5c）。进一步使用了EdU标签标记分裂和复制细胞。图5d可以看到，在幼蝇中缺失jouvence，EdU标记的细胞数量增加了（与核内复制性EC的数量增加有关），而野生型WT老龄蝇EdU标记细胞的数量增加（图5b）。总而言之，这些结果表明，在缺失jouvence果蝇中观察到的EC数目增加是由于细胞的较高增殖所致。
jouvence调节肠上皮细胞的核内复制
首先，量化细胞核中DAPI染色荧光量反映DNA的数量。图5e显示与WT型对照相比，在缺失jouvence蝇中DNA的数量减少了，表明核内复制较少。有趣的是，在携带有基因组拯救的转基因的果蝇（Del + rescue-1）中以及过表达jouvence的缺失果蝇（Del，Mex-Gal4> UAS-jou8M）DNA的数量减少。进一步量化在WT遗传背景中过表达snoRNA-jouvence的果蝇中的核内复制，尤其是当仅使用成年基因表达系统在成年期表达时。喂食RU486以诱导其表达后，与未喂食的RU486对照相比，核内复制增加了（Mex-GS> jou1M），这表明jouvence在EC中参与了多倍体的控制。其次，通过RT-qPCR定量了已知参与核内复制周期的主要基因之一Cyclin-E（图5f）。在缺失jouvence果蝇中DAPI染色定量的DNA数量的减少，同时Cyclin-E RNA的表达降低，这一结果也得到了接下来的RNA-Seq分析结果的支持。因此，这些结果表明snoRNA-jouvence参与EC的核内复制。
jouvence在体内的表达（northern blot）
通过Northern blot进一步验证jouvence的表达。图6以在对照WT、携带有基因组拯救的转基因（Del + rescue-1）以及肠道中jouvence的靶向表达（Del，Myo1A-Gal4> jou8M和Del，Mex-Gal4> jou8M）果蝇检测到约150个核苷酸的条带与预期的jouvence大小相对应。snoRNA-jouvence伪尿苷化rRNA。根据已报道的主要注释snoRNA:Ψ28S-1153的生物信息学研究，预计snoRNAjouvence（snoRNA:Ψ28S-1153）将在位置1153催化28S-rRNA碱基的修饰。进一步检查从肠中提取的rRNA是否确实被伪尿嘧啶化。如图6b所示正如所预期的，在WT-Control果蝇中28S-rRNA的1153位处被伪尿嘧啶化，而在缺失jouvence果蝇中未被伪尿苷化，这表明该位点特异性伪尿素化需要jou。在携带已被基因组拯救的转基因的Jou缺失果蝇（Del + Surve-1）中以及在肠道中具有特异靶向表达Jouvence的果蝇中（Del，Myo1A-Gal4> jou8M和Del， Mex-Gal4> jou8M）证明了伪尿嘧啶化机制恢复。此外，在野生型对照果蝇中18S-rRNAd的1425位的伪尿嘧啶化，由于缺失jouvence导致其消失（图6c），而在基因组拯救的果蝇（Del + rescue-1和Del + rescue-2）和肠道特异性靶向表达（Del，Mex-Gal4> jou8M）中被恢复。
缺失jouvence的果蝇中的部分基因失调
利用转录组分析WT野生型和Jou缺失的果蝇肠道组织，显示314个基因被上调，319个基因被下调（图7a、b）。KEGG分析显示，有20条途径在统计学上被上调（图7c），最主要的是代谢途径，包括55个差异基因，而只有6条途径被下调（图7d），被最下调的途径是谷胱甘肽代谢途径。此外，GO分析显示，大多数失调的基因都具有催化活性。
为了验证RNA-Seq结果，选择了差异变化程度最高的基因对肠道组织进行RT-qPCR。图8显示GstE5（谷胱甘肽S转移酶E5），Gba1a（葡萄糖脑苷脂酶1a）、LysB（溶菌酶B）和ninaD上调，而CG6296（脂肪酶和磷脂酰胆碱1-酰基水解酶）、Cyp4p2（细胞色素P450-4p2）下调，证实了RNA-Seq的结果。通过对rescue基因型的分析证实了jou调控这些基因。以上结果表明，snoRNA-jou的长寿功能取决于其调节mRNA水平或核糖体RNA稳定性，甚至可能调节肠上皮细胞基因表达的能力。但是，这种精确的机制仍有待进一步研究。
过表达jouvence仅使少数基因失调
使用Gene-Switch系统（Mex-GS> jou8M）对仅在成年后才表达条件性成年蝇的肠进行了RNA-Seq，将RU486喂养的蝇（诱导表达）与没有RU486喂养的蝇（控制非诱导）进行了比较。出乎意料的是，结果显示jouvence过表达果蝇中只有9个基因被解除调控（图9）。KEGG分析显示，它们主要参与剪接体和长寿调节途径，其中表达最上调的是Hsp70Bb基因（Heat-shockprotein-70Bb）。
恢复ninaD或CG6296的mRNA水平可以挽救生命。
首先，选择由RNA-Seq中最上调的基因之一ninaD，RNAi降低和恢复其mRNA水平。ninaD-RNAi的靶向表达，特别是在肠道中，更确切地说，仅在成年期就足以降低和恢复mRNA水平（图8 g-插图），从而延长寿命（图8g）。相反对于下调最多的基因之一CG6296，为了恢复其转录水平，构建了UAS-cDNA和转基因蝇系。CG6296 cDNA的靶向表达，特别是在肠道中和仅在成年后才恢复mRNA水平（图8h-插图），并且还会大大延长寿命。这些结果突出了snoRNA对核糖体RNA的作用、一些下游失控的基因与寿命之间的遗传和分子联系。同时研究转基因品系对干燥和饥饿的抵抗力，发现jouvence对压力的有害作用具有保护作用。
snoRNA jouvence通过进化得以保留
使用BLAST和三级结构基序搜索进行的生物信息学分析揭示了果蝇中的12种jou同源物、小鼠中的2种同源物和人中的1种同源物（图10），表明该特定snoRNA的进化正压力。在小鼠中，假定snoRNA jouvence位于15号染色体位置：30336889–30337017和位于18号染色体位置：6495012–6495133。人类独特的假定snoRNA jouvence位于11号染色体位置：12822722–12822880。
为了进一步探索snoRNA优势在哺乳动物中的推定作用，我们通过RT-PCR评估了人类和小鼠各种组织中的表达。在人类中，在肠道、大脑中检测到独特的假定snoRNA jou同源物，在卵巢和肾脏中检测到信号较弱。在小鼠大脑中检测到snoRNA-15，但在卵巢、肾脏和肠中未检测到，而在小鼠脑、卵巢中检测到snoRNA-18，但在肾脏中未检测到。
讨论
本研究报告一个被命名为jouvence（jou）的snoRNA（snoRNA:Ψ28S-1153）的鉴定和分子表征，其缺失会降低寿命，反之过表达则会使其寿命增加。通过一系列遗传试验，证明jouvence在肠胃上皮中起作用以促进寿命，而与另外两个位置的snoRNA无关。在果蝇中，寿命和肠道之间的关系已有报道。在老龄野生型果蝇中，ISC过度增殖会导致ISC子代细胞错误分化，从而导致肠道增生：“过度增殖性疾病”。有趣的是，在肠道上皮细胞中保留过度增殖可以延长寿命。在缺失jouvence果蝇中老龄和年轻之间增生程度更高。进一步标记也证实发现与对照WT相比，缺失jouvence果蝇中ISC的数量增加，以及分裂细胞的数量（抗PH3和EdU）增加。综合考虑，表明缺失jouvence果蝇中的增殖稳态的破坏更高。更惊人的是，在缺失系或野生型遗传背景中过表达jou可防止老龄果蝇的增生。最近，在秀丽隐杆线虫研究中发现核仁大小和寿命之间的联系，是一种与核仁蛋白原纤维蛋白有关的机制。原纤维蛋白与C/D box的snoRNA相关，而snoRNA jouvence属于H/ACA box，不涉及原纤维蛋白。本研究扩展了这些发现，进一步确认核仁与长寿有关。
许多寿命基因显示出可以改变对压力的抵抗力。有趣的是，jou功能的丧失降低了对干燥的抵抗力，而相反，回复或过表达jou增加了对该压力的抵抗力，可能是由于对过表达的RNA-Seq揭示的Hsp78Bb基因表达水平的提高有关，这一假说尚待检验。但是每种压力结果不尽相同，可能是依赖于特定的生理和/或代谢参数，不同压力参数不同。
RNA-Seq和RT-qPCR分析揭示了部分基因的上调或下调。有趣的是，长寿最典型的途径包括胰岛素信号通路（InR、chico、FOXO、dILP3）在缺失jouvence果蝇中被下调，而dILP4则被上调。RNA-Seq揭示的第2个惊人发现与报道的秀丽隐杆线虫、果蝇和小鼠中Myc/核糖体生物发生与寿命之间的联系有关。
实际上，据报道几种snoRNA是Myc的靶标。然而，对Myc靶基因研究中未鉴定到snoRNA jouvence。这一事实得到了以下事实的佐证，即在jouvence基因附近和Myc基因附近未发现任何Myc共有E-box序列（CACGTG）并且核糖体的生物发生途径在缺失jouvence果蝇中不受影响。因此，这种独立于Jou的Myc调节反而导致这样的假设，即jouvence可能通过假尿苷化作用核糖体的稳定性和/或优化了核糖体的功能，而不是直接作用于核糖体的合成。另外，对于某些差异基因（GstE5、Gba1a和LysB），jou显然是导致这种失调的snoRNA。但是，对于其他一些基因（ninaD、CG6296和Cyp4p2），调控机制似乎更加复杂，要么需要非常精确的snoRNA-jou水平，要么可能涉及其他两个假定的snoRNA。为了确定并确认snoRNA jouvence、失调的基因和长寿表型之间的联系，验证了其中的两个基因（ninaD和CG6296），发现对于确定寿命都至关重要（图8）。但是，Gba1a基因表达的恢复无法恢复果蝇的寿命。有趣的是，这两个基因与脂质和/或胆固醇代谢有关。实际上，ninaD编码与哺乳动物B类I型清道夫受体SR-BI同源的膜蛋白。在哺乳动物中，SR-BI在胆固醇和高密度脂蛋白（HDL）代谢以及维持血浆胆固醇水平中起着关键作用。CG6296（一个尚未明确表征的基因）具有类似于三酰甘油脂肪酶家族的蛋白质结构域，具有预测的脂肪酶活性和磷脂酰胆碱1-酰基水解酶活性，提示其在脂质代谢中起作用。
综上，这些结果表明snoRNA jouvence涉及许多mRNA水平的微调。研究已经证明，jouvence伪尿嘧啶化28S-rRNA和18S-rRNA。因此，snoRNAjouvence可能在rRNA的成熟和/或稳定中起作用，其他调控影响现阶段尚不能确认。例如，将需要进一步的实验来确定核糖体的3D结构构象（假尿嘧啶化或非假尿酸化），以回答这个精确的问题。最后，尽管人们普遍认为snoRNA可能主要是所有细胞中普遍存在的持家机制，但本研究结果却主张在某些组织存在特定的snoRNA机制，例如在这里为肠的上皮中。
根据其主要序列，jou属于H/ACA snoRNA22。有趣的是在人类中某些病理已与其分类的snoRNA相关。例如，端粒酶（RNP逆转录酶）的snoRNA的H/ACA box发生突变会产生多效性遗传疾病。因此，推测哺乳动物的jouvence直系同源物可以在小鼠和人类中发挥重要作用，但仍有待研究。
评论
本文描述了一个小的核仁RNA（snoRNA:Ψ28S-1153），由于其与寿命相关，缺失会降低寿命，因此将其命名为jouvence（jou）即为青春。jou在肠上皮细胞中表达。其缺失可导致肠道增生，靶向表达可防止增生、挽救并显着延长寿命。由于snoRNA非常保守，在小鼠和人类中都鉴定出直系同源物。可以看出jou是研究肠道、衰老和寿命之间关系的理想候选对象。由于果蝇和哺乳动物的肠道细胞在细胞和分子水平上都非常相似，而snoRNA在整个进化过程中都非常保守，可以假设哺乳动物也存在这样的机制。因此，snoRNA jouvence可能改善健康衰老的有前途的治疗候选物。
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