WB实验的成功与否和缓冲剂有无关系

近期了解到有实验人员反应，作WB实验有失败的情况，怀疑与实验中使用的缓冲剂有关，可能是缓冲剂未灭菌或配制成溶液后感染了细菌导致的。那么WB实验的失败是否真的与缓冲剂染菌造成的呢？

WB实验即western blot蛋白质印迹实验，或称为免疫印迹实验，是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。WB实验失败的原因有很多，缓冲剂只是其中一个影响因素。

缓冲剂长菌对WB实验影响

WB实验通常是不要求在无菌条件下操作的，因为本实验基本不会受到影响。基本可以确定，WB实验的失败不会是因为缓冲剂染菌导致，是其它原因。缓冲剂里即使有残留的细菌，其含有的蛋白质量是极少的，如果对实验产生影响，那么缓冲剂肯定早已经严重变质了，会直接注意到而不会使用。缓冲剂在发生这么严重的污染之前应该早就用完了。

缓冲剂离子强度对WB实验影响

缓冲剂未灭菌虽然对WB实验不会造成影响，不过其离子强度不合适有可能会造成WB实验失败。实验中通常是采用Tris作为缓冲剂，它有着较低的离子强度，不过在电泳过程中，通常会增加氯化钠，以提高离子强度加快电泳速率。而离子强度过高的话可能造对蛋白质造成影响，使WB实验失败。另外也要控制好缓冲剂pH值，这对WB实验至关重要。

所以说缓冲剂未灭菌或染菌与WB实验失败关系不大，更应该考虑缓冲剂的离子强度、pH值是否合适或者样品制备等问题。