烧伤瘢痕区富含血小板血浆注射减轻神经性瘢痕疼痛 3 身材总监烧烫伤弹力衣定制
腰椎前角的共聚焦双免疫染色图像进一步证实，大多数p-PTEN、PTEN、p-mTOR和mTOR信号倾向于定位于NeuN阳性神经元细胞（图3）。
皮下注射PRP可降低烧伤神经病理性疼痛模型脊髓背角p-p38和p-NFκB免疫反应性
为探讨PRP对脊髓背角p-p38和p-NFκB活化的影响，采用双重免疫荧光染色法对p-p38和p-NFκB（分别为中枢致敏和炎症标志物）进行定量。D组p-p38和OX42双阳性细胞总数较C组明显减少（C组为40.76%±6.22%，D组为21.72%±1.11%，p<0.05）。此外，C组表达p-NFκB的小胶质细胞数量显著高于C组（C组21.96%±1.94%，D组6.62%±1.51%，p<0.01；图4）。
皮下注射PRP可降低烧伤后脊髓背角CCL2表达，增加CCR2表达强度
我们检测了皮下注射和不注射PRP的烧伤后脊髓背角CCL2和CCR2的表达。烧伤后大鼠背角CCL2免疫反应性显著降低（C组为33.05±1.49%，D组为16.87±1.86%，p<0.05），CCR2/NeuN免疫反应性显著升高（C组为58 242.00±12 198.61，D组为77 912.33±1277.77，p<0.05）。这些结果表明PRP可以减轻烧伤引起的神经病理性疼痛（图5）。
皮下注射PRP可降低脊髓背角星形胶质细胞p-JNK和p-NFκB的免疫反应性
为了研究PRP对脊髓背角p-JNK和p-NFκB活化的影响，通过双重免疫荧光染色对p-JNK、p-NFκB和GFAP（分别是中枢致敏、炎症和星形胶质细胞标记物）进行定量（图6）。与C组相比，D组p-JNK/GFAP双阳性细胞和p-NFκB/GFAP双阳性细胞的比例明显降低（C组为8.89%±1.57%，D组为2.08%±0.59%，p<0.01；C组为29.86%±3.34%，D组为7.48%±2.73%，p<0.01）。在我们的研究中，JNK和NFκB通路参与了促炎性细胞因子的产生，而这些细胞因子又可能成为神经炎症和神经病理性疼痛。
讨论
在这项研究中，我们证明皮下注射PRP治疗烧伤引起的神经病理性疼痛可以减轻神经病理性疼痛。这种治疗策略也改善了皮肤和脊髓神经性疼痛参数的表达。我们的研究结果表明，PRP皮下注射在烧伤引起的疼痛性瘢痕中对改善烧伤引起的神经病理性疼痛具有潜在的有效性。
PRP通过离心制备血小板浓度超过基线值的自体血液样本。因此，血小板浓度、活性和PRP中的产量可能因离心步骤、力和迭代次数而异。在美国，已有超过10种商业化的PRP制备系统获得美国食品药品监督管理局的批准。在本研究中，我们使用了台湾台北AesMed有限公司生产的PRP管。根据我们的结果，PRP中的血小板计数和PDGF-AA/BB、VEGF和EGF浓度显著高于血浆中的血小板计数和PDGF-AA/BB、VEGF和EGF浓度（表1），1），证实本研究中使用的PRP具有高浓度的生长因子和血小板。
据我们所知，目前还没有关于PRP治疗烧伤引起的神经病理性疼痛的研究报道。据报道，PRP是一种抗炎剂，可减少促炎介质。PRP的抗炎作用是通过减少NFκB反式激活来实现的，NFκB是炎症过程的关键调节因子。我们的结果与已知的现象一致，即在瘢痕周围局部注射PRP可减少脊髓背角的炎症。此外，软骨发生研究报道PRP降低炎症酶环氧合酶2和4（COX-2和-4）的表达，也降低去整合素和金属蛋白酶与血小板反应蛋白基序的基因表达。这些报道都提示PRP具有抗炎作用。
我们的文献回顾显示PRP剂量和治疗间隔缺乏标准化。因此，评价PRP临床疗效的研究结果一直存在争议。一项膝关节骨关节炎研究表明，每隔2至4周注射2至4次PRP是有效的。此外，自体PRP注射在减轻疼痛和恢复关节功能方面比透明质酸注射具有更大和更长的疗效。这些结果表明PRP具有持久的抗炎作用。PRP中血小板浓度的大小和有效性取决于制备技术。此外，激活剂的使用、PRP中白细胞的存在、应用频率和血小板计数的范围目前都存在争议。此外，许多研究采用了短期随访。在本研究中，按照商业制造商的建议，通过标准化方法制备PRP，并且不使用过滤器；注射11亿-14亿个血小板，比基线值高6倍；该范围在推荐范围内，与许多研究中使用的范围相似（表（表1）。我们将0.4ml PRP注射到后足区，这个注射量是基于我们之前在脂肪移植物注射和干细胞治疗方面的研究。
Zhang等人发现脊髓mTOR的激活是慢性缩窄性损伤（CCI）引起的神经病理性疼痛的重要组成部分。通过鞘内注射PRP抑制脊髓mTOR通路可以减少机械性痛觉超敏，这意味着在神经病变大鼠中，抗伤害作用是基于抑制脊髓mTOR通路。在本研究中，我们观察到p-mTOR在烧伤引起的神经病理性疼痛后的上调（图3）。最近对脑损伤模型和脊髓CCI模型的研究表明，PTEN是中枢神经系统mTOR的上游抑制介质。PTEN在抗神经病理性疼痛方面也发挥了有益的作用，因此PTEN在神经病理性疼痛的啮齿类动物模型中发挥了重要作用。我们的结果表明，烧伤引起的神经病理性疼痛降低了后足皮肤和脊髓背角的PTEN免疫反应性，并且在后足皮下注射PRP增加了这两个区域的PTEN免疫反应性，同时也降低了mTOR免疫反应性。此外，皮下注射PRP可阻断后足的神经性机械性痛觉超敏，这种效应持续了2周以上（图11）。
在神经损伤模型中，星形胶质细胞和小胶质细胞的活化增加以及炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的上调促进了持续性疼痛。33本研究中观察到的CCL2选择性细胞定位表明，烧伤后的神经元活化导致CCL2趋化因子的分泌，进而导致中枢敏化和超敏反应；注射PRP后，CCR2显著下调。12还应考虑CCL2诱导的疼痛促进的其他可能机制，如CCL2诱导的痛觉过敏和脊髓水平神经元中CCR2的表达，以及CCL2增强脊髓神经元中NMDA诱导的电流。12此外，CCR2可能与疼痛神经元中的NMDA受体相互作用路径。总之，CCL2/CCR2信号传导的作用是导致持续性神经病理性疼痛的原因，而注射PRP可下调CCL2的表达。
结论
PRP降低神经元细胞中p-PTEN、p-mTOR和CCL2的表达。此外，它还降低了小胶质细胞中p-p38和p-NFκB的表达以及脊髓星形胶质细胞中p-JNK和p-NFκB的激活，表明炎症减轻。因此，我们的研究结果提供了证据，PRP由于其抗炎作用，可作为治疗烧伤引起的神经病理性疼痛的替代治疗方法。