小鼠避暗实验方法及注意事项?
大小鼠避暗实验系统,实验装置分明、暗两室。明室大小为11cm x 3.2cm。暗室较大,大小为17cm x 3 . 2ctn。两室之间有一直径为3cm大小的圆洞。两室底部均铺以铜栅。暗室底部中间位置或中后部的铜栅可以通电,电压强度可由软件自由控制,一般采用40V电压。软件通过摄像机可自动记录潜伏期的时间。
此法系利用鼠类的嗜暗习性而设计的。将小鼠面部背向洞口放入明室,同时启动软件。动物穿过洞口进入暗室受到电击,记录电击次数。取出小鼠,记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间,此即潜伏期。24h后重作测验,记录进入暗室的动物数、潜伏期和5 rnin内的电击次数。
根据大量研究,小鼠平均潜伏期约十几秒。训练期接受一次电击后,记忆的保持可持续1周之久。另有作者在动物进入暗室后,即将洞口关闭,使动物在暗室接受一规定时间和一规定电流强度的电击,然后取出动物。经此电击的动物,记忆的保持更为牢固。
本法优缺点:简便易行。反应箱越多,同时训练的动物数也越多。以潜伏期作为指标,动物间的差异小于跳台法。对记忆过程特别是对记忆再现有较高的敏感性。
避暗实验设备
包括避暗箱、SuperShock刺激控制器和SuperPas避暗软件。这里介绍上海欣软信息科技有限公司生产的避暗箱。它包括左右两个同等大小(20.3cm*15.9cm*21.3cm)的隔室(compartment)。其中一隔室用一黑色布套包裹,形成暗箱(主动回避可不用暗箱)。两隔室之间由一个拱形门(8.9cm*11.4cm)相联,门可由实验者根据实验需要关上或打开。隔室地板为不锈钢栅栏(直径:大鼠4.8mm,小鼠3.175mm)。暗箱一侧的栅栏地板与刺激器相联,并可给予电击;明箱一侧则不与刺激器相联,故没有电流通过。
实验方法
小鼠穿梭被动回避实验(mouse step-through passive avoidance)
1.单次电击刺激训练
(1)将小鼠放入明箱,10s后,将明暗箱之间的门打开。多数品系的小鼠有很强的探究行为,喜暗恶光。因此,小鼠会很快进入暗箱。
(2)小鼠(四肢)完全进入暗箱后,立即将中门关上,并给予一次电击。电击强度为能引起小鼠退缩和发声的*小电流。根据小鼠品系不同,电流范围为0.2~0.8mA(100V,50~60Hz AC),持续1~2s。
(3)让小鼠在暗箱内停留10s(以使让动物形成箱与电击之间的关联),将小鼠放回笼内。清洁操作箱。进行下一只动物的训练。
2.记忆保持测试(retention test) 电刺激训练24h后,将小鼠放回明箱,中门打开,但不给电击。